جلد 26، شماره 10 - ( 10-1398 )
جلد 26 شماره 10 صفحات 18-8 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Aalizade R, Kardan N, Khodakarami A, Khajeh K, Dabirmanesh B. Cloning, expression and Characterization of Carboxypeptidase G2 Enzyme from E.coli. RJMS 2019; 26 (10) :8-18
URL: http://rjms.iums.ac.ir/article-1-5093-fa.html
URL: http://rjms.iums.ac.ir/article-1-5093-fa.html
عالی زاده رضا، کاردان نسرین، خداکرمی عاطفه، خواجه خسرو، دبیرمنش بهاره. کلون، بیان، تخلیص و تعیین خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم کربوکسی پپتیداز G2. مجله علوم پزشکی رازی. 1398; 26 (10) :8-18
دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران ، dabirmanesh@modares.ac.ir
چکیده: (3686 مشاهده)
زمینه و هدف: متوتروکسات یکی از داروهای پرمصرف در شیمی درمانی است که نارسایی کلیوی یکی از عوارض جانبی آن است. آنزیم کربوکسی پپتیدازG2 (گلوکارپیداز تحت نام تجاری وراکساز) آنزیمی باکتریایی است که میتواند متوتروکسات را به متابولیت‌های غیرفعال خود تبدیل کند و پس از درمان با دز بالای متوتروکسات، منجر به حذف آن از مسیر غیرکلیوی می‌شود.
روش کار: در این پروژه ابتدا ژن کربوکسی پپتیداز G2 به دست آمده از سایتNCBI (Accession number: ACY05517) در داخل وکتور pUC57 توسط شرکتGene Cust سنتز شد ,سپس برای ادامه روند، وکتور pUC57 که حاوی ژن کربوکسی پپتیداز G2 بود از باکتری استخراج شد و به عنوان الگو در واکنش PCR به همراه پرایمرهای دارای سایت برشNdeI و XhoIمورد استفاده قرار گرفت. پس از آن بر روی محصولPCR هضم آنزیمی صورت گرفت و در بین سایت‌های مورد نظر در وکتور بیانی pET28a کلون گردید. در نهایت پلاسمید نوترکیب به داخل سویه بیانی E. coli BL21 ترنسفورم شد و تعدادی از پلاسمیدهای تایید شده از طریق Colony PCR برای تعیین توالی با پرایمر T7 promotor و T7 terminator، ارسال شدند. نتایج تعیین توالی نیز حضور ژن را تایید کردند، پس از آن بیان تحت شرایط بیانی مختلف بهینه گردید.
یافته‌ها: بیشترین سطح بیان در غلظت 5/0 میلی مولار IPTG دمای 25 درجه سانتیگراد و مدت زمان انکوباسیون 6 ساعت تعیین شد. در انتها پروتئین مورد نظر از طریق کروماتوگرافی تمایلی نیکل آگارز تخلیص و ویژگی های سینتیکی آن بررسی شد. pH و دمای بهینه فعالیت آنزیم به ترتیب 7 و ˚C25 به دست آمد. برای سوبسترای متوتروکسات μM 24Km= و μmol/min 005431/0 Vmax = محاسبه شد.
نتیجه‌‌گیری: این مطالعه به منظور تولید و فرآوری آنزیم کربوکسی پپتیداز G2 بوده و در آینده این آنزیم میتواند کاندیدای بالقوه ای برای کاهش اثرات جانبی شیمی درمانی باشد.
روش کار: در این پروژه ابتدا ژن کربوکسی پپتیداز G2 به دست آمده از سایتNCBI (Accession number: ACY05517) در داخل وکتور pUC57 توسط شرکتGene Cust سنتز شد ,سپس برای ادامه روند، وکتور pUC57 که حاوی ژن کربوکسی پپتیداز G2 بود از باکتری استخراج شد و به عنوان الگو در واکنش PCR به همراه پرایمرهای دارای سایت برشNdeI و XhoIمورد استفاده قرار گرفت. پس از آن بر روی محصولPCR هضم آنزیمی صورت گرفت و در بین سایت‌های مورد نظر در وکتور بیانی pET28a کلون گردید. در نهایت پلاسمید نوترکیب به داخل سویه بیانی E. coli BL21 ترنسفورم شد و تعدادی از پلاسمیدهای تایید شده از طریق Colony PCR برای تعیین توالی با پرایمر T7 promotor و T7 terminator، ارسال شدند. نتایج تعیین توالی نیز حضور ژن را تایید کردند، پس از آن بیان تحت شرایط بیانی مختلف بهینه گردید.
یافته‌ها: بیشترین سطح بیان در غلظت 5/0 میلی مولار IPTG دمای 25 درجه سانتیگراد و مدت زمان انکوباسیون 6 ساعت تعیین شد. در انتها پروتئین مورد نظر از طریق کروماتوگرافی تمایلی نیکل آگارز تخلیص و ویژگی های سینتیکی آن بررسی شد. pH و دمای بهینه فعالیت آنزیم به ترتیب 7 و ˚C25 به دست آمد. برای سوبسترای متوتروکسات μM 24Km= و μmol/min 005431/0 Vmax = محاسبه شد.
نتیجه‌‌گیری: این مطالعه به منظور تولید و فرآوری آنزیم کربوکسی پپتیداز G2 بوده و در آینده این آنزیم میتواند کاندیدای بالقوه ای برای کاهش اثرات جانبی شیمی درمانی باشد.
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
بیوشیمی بالینی
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
