جلد 11، شماره 44 - ( 12-1383 )
جلد 11 شماره 44 صفحات 985-979 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Shafiee S, Keyhani M, Shabani M, Koochaki Shalmani I, Kaviani M. Extraction and Development of Multi-Step Purification of Angiotensin-I Converting Enzyme(ACE) from Rabbit Lung. RJMS 2005; 11 (44) :979-985
URL: http://rjms.iums.ac.ir/article-1-99-fa.html
URL: http://rjms.iums.ac.ir/article-1-99-fa.html
شفیعی سیدمحمد، کیهانی مهیندخت، شعبانی محمد، کوچکی شلمانی اسماعیل، کاویانی مهرانگیز. استخراج و بهینه‌سازی تخلیص چند مرحله‌ای آنزیم تبدیل کننده آنژیوتانسین I(ACE) از ریه خرگوش . مجله علوم پزشکی رازی. 1383; 11 (44) :979-985
چکیده: (9238 مشاهده)
آنزیم تبدیل کننده آنژیوتانسین I(ACE) یک پپتیدیل دی پپتید هیدرولاز است که 2 اسید آمینه انتهای کربوکسیلی(His-Leu) را از آنژیوتانسین I که یک دکاپپتید است جدا کرده و آنژیوتانسین II(یک اکتاپپتید) را تولید می‌نماید. به علت اهمیت ACE و مهارکننده‌های آن در بیماری‌زایی و درمان بیماری‌های قلبی عروقی مانند فشار خون بالا و نارسایی قلبی، تخلیص و سنجش آن علاوه بر ارزش علمی دارای اهمیت بالینی و تجاری می‌باشد. با توجه به این مطلب، در مطالعه حاضر ACE از بافت ریه خرگوش به عنوان منبــع غنـی از ACE در 3 مرحله خالص گردید. برای استخراج ACE، پس از عمل هموژن کردن، از دترژنت غیریونی 40P-Nonidet استفاده شد سپس محلول استخراج شــده از دترژنــت، تحــت عمل رسوب‌دهی با سولفات آمونیوم با غلظت‌های اشباعی 50% و 70% قرار گرفــت. در مرحلــه بعــد محلول رویی به دست آمده توسط تبادل یونی با Q-Sepharose HP کروماتوگرافی شد سپس نمونه‌های دارای حداکثر فعالیت مخصوص آنزیم، توسط 200Sepharryl HR S تحت کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون قرار گرفتند. پس از این مرحله خالص بودن آنزیم با SDS-PAGE و PAGE تایید شد و وزن مولکولی آن 175 کیلودالتون تعیین گردید. فعالیت مخصوص نهایی به دست آمده برای ACE، 1/39 واحد در میلی‌گرم بود که به دنبال 651 برابر خالص‌کردن حاصل شده بود و بازده نهایی فرآیند تخلیص، 2/5% مشاهده شد. پس از تخلیص آنزیم، Km(michaelis constant) آن برای سوبسترای HHL(هیپوریل ـ هیستیدیل ـ لوسین)، 17/2 میلی‌مول محاسبه شد. مهار کننــده رقابتــی کاپتوپریــل توانست در غلظت‌های 1/0 تا 001/0 میلی مولار تقریباً ACE را به طور کامل مهار کنــد. PH اپتیمم برای ACE 3/8 محاسبه گردید. هم‌چنین بررسی اثر تغییرات دمایی، کاهش شدیــد در فعالیت آنزیم را در دمای بالاتر از 37 درجه سانتی‌گراد نشان داد. کاهش مراحل تخلیص و مــدت زمان لازم برای آن و نیز بازده مناسب به دست آمده، نتیجـه استفاده از رزین‌های با قدرت تفکیــک بهتـر و به کار گیـری سیستم FPLC(Fast Protein Liquid Chromatography) بود که در نهایت موجب بهبود و کاهش زمان فرآیند تخلیص چند مرحله‌ای ACE گردید.
واژه‌های کلیدی: 1 – آنزیم تبدیل کننده آنژیوتانسین، 2 – تخلیص چند مرحله‌ای، 3 – کروماتوگرافی، 4 – ریه
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
