جلد 24، شماره 163 - ( دی 1396 )
جلد 24 شماره 163 صفحات 91-80 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Amerian M, Nazarian S. Evaluation and comparison of antibody titers against single recombinant proteins, mixtures and chimer CTXB, TCPA and CTXB-TCPA. RJMS 2018; 24 (163) :80-91
URL: http://rjms.iums.ac.ir/article-1-4920-fa.html
URL: http://rjms.iums.ac.ir/article-1-4920-fa.html
عامریان میلاد، نظریان شهرام. ارزیابی و مقایسه تیتر آنتی بادی علیه پروتئین های نوترکیب منفرد، مخلوط و کایمر CTXB، TCPA وTCPA CTXB-. مجله علوم پزشکی رازی. 1396; 24 (163) :80-91
ارزیابی و مقایسه تیتر آنتی بادی علیه پروتئین های نوترکیب منفرد، مخلوط و کایمر CTXB، TCPA وTCPA CTXB-
دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران. ، nazarian56@gmail.com
چکیده: (4330 مشاهده)
زمینه و هدف: وبا به عنوان بیماری اسهالی یکی از مهم‌ترین علل مرگ و ناتوانی در افراد جوامع مختلف به شمار می‌رود. فاکتور کلونیزاسیون پیلی tcpA و توکسین کلرا مهم‌ترین فاکتورهای بیماری‌زایی ویبریوکلرا می‌باشند. زیر واحد B سم کلرا (ctxB) و tcpA توانایی القای پاسخ های ایمنی را دارند. ﻫﺪف از ایﻦ ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ، ﺗﻮﻟﯿﺪ پروتئین های نوترکیب CTXB ، TCPA و CTXB-TCPA و مطالعه ایمنی زایی و مقایسه تیتر آنتی بادی کایمر، مخلوط و جداگانه پروتئین های نوترکیب در موش بود.
روش کار: در این مطالعه تجربی، ژن هایctxB ،tcpA و کایمر ctxB-tcpA در وکتورهای بیانی (+) pET28a و (+) pET32a همسانه سازی و پلاسیمدهای نوترکیب به coli BL21 DE3. E منتقل شدند. بیان پروتئین های نوترکیب با IPTG القا و با روش SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ بررسی شد. جهت تخلیص پروتئین نوترکیب از کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA استفاده شد. ایﻤن سازی موش‌ها ﺑﻪ روش درون صفاقی و زیر پوستی انجام شد. ﺗﯿﺘﺮ آنتی‌بادی در سرم موش های ایمن شده ﺑﺎ روش اﻻیﺰا ﻣﻮرد ارزیﺎﺑﯽ ﻗﺮار گرفت.
یافته‌ها: آنالیز SDS PAGE و وسترن بلاتینگ، بیان و تخلیص پروتئین های نوترکیب را تائید کرد. میزان پروتئین های خالص شده CTXB، TCPA و CTXB-TCPA به ترتیب 570/15، 533/11 و 100/33 میلی گرم در لیتر بود. نتایج الایزا نشان داد که ایمنی‌زایی موش ها به خوبی صورت پذیرفته است. تفاوت معنی داری در تیتر آنتی بادی علیه آنتی ژن های CTXB-TCPA و مخلوط TCPA با CTXB وجود نداشت. همچنین ﺗﻔﺎوت معنی‌داری در ﺗﯿﺘﺮ آنتی‌بادی حاصل از تزریق درون صفاقی و زیرپوستی مشاهده نشد.
نتیجه‌گیری: اﺧﺘﻼف جزئی در ﺗﯿﺘﺮ آنتی‌بادی پروتئین‌ها ﻣﻤﮑﻦ اﺳﺖ ﺑﻪ ﻃﻮل ﻋﻤﺮ سلول‌های ﺧﺎﻃﺮه ﺣﺎﺻﻠﻪ در ایﻦ گروه‌ها و همچنین روش تزریقی آن‌ها ارﺗﺒﺎط داشته باشد. با توجه به مزیت های پروتئین های کایمر، CTXB-TCPA می تواند جایگزین مناسبی برای مخلوط پروتئین ها جهت تحریک سیستم ایمنی باشد.
روش کار: در این مطالعه تجربی، ژن هایctxB ،tcpA و کایمر ctxB-tcpA در وکتورهای بیانی (+) pET28a و (+) pET32a همسانه سازی و پلاسیمدهای نوترکیب به coli BL21 DE3. E منتقل شدند. بیان پروتئین های نوترکیب با IPTG القا و با روش SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ بررسی شد. جهت تخلیص پروتئین نوترکیب از کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA استفاده شد. ایﻤن سازی موش‌ها ﺑﻪ روش درون صفاقی و زیر پوستی انجام شد. ﺗﯿﺘﺮ آنتی‌بادی در سرم موش های ایمن شده ﺑﺎ روش اﻻیﺰا ﻣﻮرد ارزیﺎﺑﯽ ﻗﺮار گرفت.
یافته‌ها: آنالیز SDS PAGE و وسترن بلاتینگ، بیان و تخلیص پروتئین های نوترکیب را تائید کرد. میزان پروتئین های خالص شده CTXB، TCPA و CTXB-TCPA به ترتیب 570/15، 533/11 و 100/33 میلی گرم در لیتر بود. نتایج الایزا نشان داد که ایمنی‌زایی موش ها به خوبی صورت پذیرفته است. تفاوت معنی داری در تیتر آنتی بادی علیه آنتی ژن های CTXB-TCPA و مخلوط TCPA با CTXB وجود نداشت. همچنین ﺗﻔﺎوت معنی‌داری در ﺗﯿﺘﺮ آنتی‌بادی حاصل از تزریق درون صفاقی و زیرپوستی مشاهده نشد.
نتیجه‌گیری: اﺧﺘﻼف جزئی در ﺗﯿﺘﺮ آنتی‌بادی پروتئین‌ها ﻣﻤﮑﻦ اﺳﺖ ﺑﻪ ﻃﻮل ﻋﻤﺮ سلول‌های ﺧﺎﻃﺮه ﺣﺎﺻﻠﻪ در ایﻦ گروه‌ها و همچنین روش تزریقی آن‌ها ارﺗﺒﺎط داشته باشد. با توجه به مزیت های پروتئین های کایمر، CTXB-TCPA می تواند جایگزین مناسبی برای مخلوط پروتئین ها جهت تحریک سیستم ایمنی باشد.
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
میکروبیولوژی
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
