میلاد عامریان، شهرام نظریان،
جلد ۲۴، شماره ۱۶۳ - ( ۱۰-۱۳۹۶ )
چکیده
زمینه و هدف: وبا به عنوان بیماری اسهالی یکی از مهم‌ترین علل مرگ و ناتوانی در افراد جوامع مختلف به شمار می‌رود. فاکتور کلونیزاسیون پیلی tcpA و توکسین کلرا مهم‌ترین فاکتورهای بیماری‌زایی ویبریوکلرا می‌باشند. زیر واحد B سم کلرا (ctxB) و tcpA توانایی القای پاسخ های ایمنی را دارند. ﻫﺪف از ایﻦ ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ، ﺗﻮﻟﯿﺪ پروتئین های نوترکیب CTXB ، TCPA و CTXB-TCPA و مطالعه ایمنی زایی و مقایسه تیتر آنتی بادی کایمر، مخلوط و جداگانه پروتئین های نوترکیب در موش بود.
روش کار: در این مطالعه تجربی، ژن هایctxB ،tcpA و کایمر ctxB-tcpA در وکتورهای بیانی (+) pET۲۸a و (+) pET۳۲a همسانه سازی و پلاسیمدهای نوترکیب به coli BL۲۱ DE۳. E منتقل شدند. بیان پروتئین های نوترکیب با IPTG القا و با روش SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ بررسی شد. جهت تخلیص پروتئین نوترکیب از کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA استفاده شد. ایﻤن سازی موش‌ها ﺑﻪ روش درون صفاقی و زیر پوستی انجام شد. ﺗﯿﺘﺮ آنتی‌بادی در سرم موش های ایمن شده ﺑﺎ روش اﻻیﺰا ﻣﻮرد ارزیﺎﺑﯽ ﻗﺮار گرفت.
یافته‌ها: آنالیز SDS PAGE و وسترن بلاتینگ، بیان و تخلیص پروتئین های نوترکیب را تائید کرد. میزان پروتئین های خالص شده CTXB، TCPA و CTXB-TCPA به ترتیب ۵۷۰/۱۵، ۵۳۳/۱۱ و ۱۰۰/۳۳ میلی گرم در لیتر بود. نتایج الایزا نشان داد که ایمنی‌زایی موش ها به خوبی صورت پذیرفته است. تفاوت معنی داری در تیتر آنتی بادی علیه آنتی ژن های CTXB-TCPA و مخلوط TCPA با CTXB وجود نداشت. همچنین ﺗﻔﺎوت معنی‌داری در ﺗﯿﺘﺮ آنتی‌بادی حاصل از تزریق درون صفاقی و زیرپوستی مشاهده نشد.
نتیجه‌گیری: اﺧﺘﻼف جزئی در ﺗﯿﺘﺮ آنتی‌بادی پروتئین‌ها ﻣﻤﮑﻦ اﺳﺖ ﺑﻪ ﻃﻮل ﻋﻤﺮ سلول‌های ﺧﺎﻃﺮه ﺣﺎﺻﻠﻪ در ایﻦ گروه‌ها و همچنین روش تزریقی آن‌ها ارﺗﺒﺎط داشته باشد. با توجه به مزیت های پروتئین های کایمر، CTXB-TCPA می تواند جایگزین مناسبی برای مخلوط پروتئین ها جهت تحریک سیستم ایمنی باشد.
