مجله علوم پزشکی رازی

    زمینه و هدف: بروسلوز، یکی از مهمترین بیماریهای مشترک بین انسان و دام است که بر اثر آلودگی با باکتری‌های جنس بروسلا(بخصوص بروسلاملی‌تنسیس) به وجود می‌آید. وقتی بروسلا در معرض افزایش درجه حرارت قرار می‌گیرد، پروتئین‌های شوک حرارتی سنتز می‌کند. در این مطالعه، بروسلاملی‌تنسیس تحت شوک حرارتی در حرارتهای مختلف قرار می‌گیرد که تحت این شوک‌ها، (hsp)Heat Shock Proteinها سنتز می‌شوند. سپس با استفاده از روش SDS-PAGE، الگوی سنتز hspها بررسی می‌شود. با استفاده از روش وسترن بلات، ایمونوژنیسیته hsp(hsp60) در مقابل سرم انسان بیمار و کنترل، مورد بررسی قرار می‌گیرد. هدف از این پژوهش، بررسی خصوصیات پاسخ شوک حرارتی در بروسلاملی‌تنسیس پس از شوک در حرارتهای مختلف است. روش بررسی: این مطالعه از نوع توصیفی تحلیلی می‌باشد. 5 باکتری بروسلاملی‌تنسیس از انسان جدا شد. سپس باکتری‌ها تحت شوک‌های حرارتی در 39، 40 و 42 درجه سلسیوس قرار گرفتند. استخراج پروتئین‌های بروسلا با سدیم دود سیل سولفات و لیزوزیم انجام شد. الکتروفورز در ژل پلی‌اکریل‌آمید در حضور سدیم دود سیل سولفات(SDS-PAGE) براساس روش لامی با بعضی تغییرات انجام گرفت. در نهایت با استفاده از روش وسترن‌بلات، ایمونوژنیسیته hsp(hsp60) در مقابل سرم انسان بیمار(مبتلا به بروسلوز) و کنترل مورد بررسی قرار گرفت. یافته‌ها: نتایج SDS-PAGE نشان داد که باندهای پروتئینی در محدوده وزنی 100-10 کیلودالتون قرار داشتند. عمده‌ترین باندهای پروتئینی، در محدوده وزنی 75-45 و 30-20 و 20-14 کیلودالتون قرار دارند. در باکتری‌های کنترل در محدوده 60 کیلودالتون، باندی مشاهده می‌شود که hsp60 می‌باشد که در حالت طبیعی(کنترل) مقدار آنها کم بود ولی در باکتری‌های شوک دیده، مقدار تولید آنها افزایش قابل چشمگیری داشته است. در واکنش پروتئین‌های پیکره بروسلاملی‌تنسیس شوک دیده با سرم افراد بیمار با وسترن بلات، چندین باند پروتئینی دیده می‌شود که در واکنش با سرم افراد کنترل، دیده نمی‌شود و در محدوده 10، 60 و 100 کیلودالتون می‌باشد. در واکنش پروتئین‌های پیکره بروسلاملی‌تنسیس شوک ندیده با سرم افراد بیمار، چندین باند پروتئینی دیده می‌شود که در واکنش پروتئین‌های با سرم افراد کنترل دیده نمی‌شود. نکته قابل توجه در واکنش پروتئین‌های پیکره بروسلاملی‌تنسیس شوک دیده با سرم افراد بیمار، وجود باند در ناحیه 60 کیلودالتونی در تمام نمونه‌هاست که این باند در واکنش پروتئین‌های پیکره بروسلاملی‌تنسیس شوک ندیده با سرم افراد بیمار، در بعضی نمونه‌ها دیده نمی‌شود یا ضعیف‌تر می‌باشد. در شوک‌های حرارتی 40 و 39 درجه سلسیوس، اختلافی در باندهای پروتئینی در SDS-PAGE در مقایسه با کنترل مشاهده نشده است. نتیجه‌گیری: نتایج بدست آمده در SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ پروتئین‌های باکتری شوک دیده با سرم افراد بیمار و کنترل، نشان‌دهنده افزایش سطح تولید hspها در شرایط شوک و ایمونوژن بودن آنها به خصوص hsp60 می‌باشد و بیانگر واکنش سرولوژیک بدن انسان در مقابل hsp60 می‌باشد. احتمالاً می‌توان از hsp60 به عنوان آنتی‌ژن در تست الایزا یا در طراحی واکسن‌‌های زیرواحد استفاده کرد.