iumssj
جلد 25، شماره 11 - ( 11-1397 )                   جلد 25 شماره 11 صفحات 52-60 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

abdollahi M, Honari H, e'temad aubi S M. Expression of SO6-STxB gene cassette in Escherichia coli and investigation of antibody titer. RJMS. 2019; 25 (11) :52-60
URL: http://rjms.iums.ac.ir/article-1-5164-fa.html
عبدالهی مسعود، هنری حسین، اعتمادایوبی سید مسیح. بیان کاست ژنی SO6-STxB در باکتری اشرشیا کلی و بررسی تیترآنتی‌بادی. مجله علوم پزشکی رازی. 1397; 25 (11) :52-60

URL: http://rjms.iums.ac.ir/article-1-5164-fa.html


دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران ، honari.hosein@gmail.com
چکیده:   (238 مشاهده)
زمینه و هدف: یکی از راه­های تقویت اثر واکسن­ها استفاده از یاور­ها می­باشد. STxB باکتری شیگلا دارای نقش یاوری و حاملی بوده و می­توان با ترکیب کردن آنتی­ژن­های کاندیدای واکسن با این یاور به تولید واکسن مناسب پرداخت. غاسول صابونی گیاهی دارای فعالیت ان-گلیکوزیداز می­باشد. ایزوفرم 6 این گیاه (SO6)، آدنین 4324 را در توالی حفاظت شده GAGA در 28SrRNA پورین­زدایی کرده و سنتز پروتئین را مختل می­کند. هدف این مطالعه، بیان ژن SO6-STxB در باکتری اشرشیا کلی و بررسی تیتر آنتی‌بادی آن در موش می­باشد.
روش کار: در این مطالعه تجربی ژن SO6 با جایگاه­های آنزیمی BamHI و SalI از پلاسمید pUC57 جداسازی گردید و در وکتور بیانی pET28a(+) حاوی ژن STxB زیرهمسانه­سازی و به باکتری اشرشیا کلی سویه BL21(DE3) تراریخت شد. بیان پروتئین نوترکیب SO6-STxB توسط IPTG القا و تخلیص به وسیله کروماتوگرافی تمایلی ستون نیکل انجام گردید. تأیید پروتئین نوترکیب با استفاده از وسترن بلات انجام گرفت. موش­‌ها به صورت صفاقی با پروتئین تخلیص شده واکسینه شدند و تیتر IgG سرم به روش ELISA مورد سنجش قرار گرفت.
یافته­ها: زیرهمسانه­سازی ژن STxB-SO6 در­­ وکتور بیانی pET28a(+) به‌وسیله واکنش PCR و هضم آنزیمی، تائید شد. پروتئین نوترکیب 5/37 کیلودالتونی تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکه­گذاری وسترن تأیید شد. سپس آنتی­بادی تولید شده از سرم موش جداسازی و توسط الایزا اندازه‌گیری گردید.
نتیجه­گیری: آنتی­ژن STxB-SO6 نوترکیب تخلیص شده می­تواند برای تحقیقات ضد سرطانی و کاندید واکسن استفاده شود.
واژه‌های کلیدی: STxB، شیگلا، غاسول صابونی، فعالیت N-glycosidase، SO6
متن کامل [PDF 1297 kb]   (48 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: بیولوژی (زیست شناسی)

فهرست منابع
1. 1. Stirpe F, Battelli M. Ribosome-inactivating proteins: progress and problems. Cell Mol Life Sci; 2006. 63(16):1850-66.
2. 2. Ferreras J, Barbieri L, Girbés T, Battelli MG, Rojo MA, Arias FJ, et al. Distribution and properties of major ribosome-inactivating proteins (28 S rRNA N-glycosidases) of the plant Saponaria officinalis L.(Caryophyllaceae). Biochim Biophys Acta; 1993. 1216(1):31-42.
3. 3. Maras B, Ippoliti R, De Luca E, Lendaro E, Bellelli A, Barra D, et al. The amino acid sequence of a ribosome-inactivating protein from Saponaria officinalis seeds. Biochem Int; 1990. 21(5):831-8.
4. 4. Duggar BM, Armstrong JK. The effect of treating the virus of tobacco mosaic with the juices of various plants. Ann Missouri Bot Gard; 1925. 12(4):359-66.
5. 5. Leah R, Tommerup H, Svendsen I, Mundy J. Biochemical and molecular characterization of three barley seed proteins with antifungal properties. J Biol Chem; 1991. 266(3):1564-73.
6. 6. Wang S, Li Z, Li S, Di R, Ho CT, Yang G. Ribosome-inactivating proteins (RIPs) and their important health promoting property. RSC Adv; 2016. 6(52):46794-805.
7. 7. Bouter A, Delord B, Dransart E, Poirier C, Johannes L, Effenterre D. Intracellular trafficking of Shiga‐toxin‐B‐subunit‐functionalized spherulites. J Cell Biol; 2008. 100(12):717-28.
8. 8. Pina DG, Johannes L. Cholera and Shiga toxin B-subunits: thermodynamic and structural considerations for function and biomedical applications. Toxicon; 2005. 45(4):389-93.
9. 9. Janssen KP, Vignjevic D, Boisgard R, Falguières T, Bousquet G, Decaudin D, et al. In vivo tumor targeting using a novel intestinal pathogen-based delivery approach. J Cancer Res; 2006. 66(14):7230-6.
10. 10. Choi NW, Estes MK, Langridge WH, Oral immunization with a shiga toxin B subunit: rotavirus NSP4 90 fusion protein protects mice against gastroenteritis. Vaccine 2005;23(44): 5168-5.
11. 11-Marcato P, Thomas P, Griener, George L, Mulvey, Glen D. Armstrong2. Recombinant Shiga toxin B-subunit-keyhole limpet hemocyanin conjugate vaccine protects mice from Shigatoxemia. Infect Immun; 2005. 73(10):6523-9.
12. 12. Honari H, Amlashi I, Minaee ME, Safaee S. [Immunogenicity in guinea pigs by IpaD-STxB
13. recombinant protein]. AMUJ; 2013. 16(4):83-93. [Persian].
14. 13. Honari H, Amlashi I, Minaei ME. [Expression of recombinant proteins IpaD-STxB and immunogenicity STxB in the mice]. J Mazandaran Univ Med Sci; 2014. 23:196-206. [Persian].
15. 14. Honari H, Minaei HH, Ebrahim M. [Analyzing the various fusions for ctxB, ipaD and stxB genes of Shigella dysenteriae and Vibrio cholera by bioinformatics tools]. Genetics in the 3rd Millennium; 2013. 11(2):3070-7. [Persian].
16. 15. Abdollahi M, Honari H, Nazarian S, Masoudi Kerahroudi M. [Subcloning and expression of SO6 gene, Saponaria officinalis plant in E. coli and investigation of antibody titer in rats]. JSSU; 2017. 24(12):1024-33. [Persian].
17. 16. Sambrook J, Russell DW. Molecular cloning: a laboratory manual 3rd edition. Coldspring-Harbour Laboratory Press, UK. 2001.
18. 17. Tonello F, Pellizzari R, Pasqualato S, Grandi G, Peggion E, Montecucco C. Recombinant and truncated tetanus neurotoxin light chain: cloning, expression, purification, and proteolytic activity. Protein Expr. Purif; 1999. 15(2):221-7.
19. 18. Chia MY, Hsiao SH, Chan HT, Do YY, Huang PL, Chang HW, et al. The immunogenicity of DNA constructs co-expressing GP5 and M proteins of porcine reproductive and respiratory syndrome virus conjugated by GPGP linker in pigs. Vet Microbiol; 2010 Dec 15. 146(3):189-99.
20. 19. Honari H, Amlashi I, Minaei ME, Safaei S. [Immunogenicity in guinea pigs by IpaD-STxB recombinant protein]. AMUJ; 2013. 83-93. Persian.
21. 20. Honari H, Amlashi ????, Minaei ME. [Expression of recombinant proteins IpaD-STxB and immunogenicity STxB in the mice]. J Mazandaran Univ Med Sci; 2014. 183-93. [Persian].
22. 21. Baranvand M, Honari H. [Nasal immunogenicity induced by STxB and STxB-IpaD antigens in laboratory rats]. Koomesh; 2015. 397-403. [Persian].
23. 22. Abdollahi M, Honari H, Nazarian SH, Masoudi Kerahroudi M. [Subcloning and expression of SO6 gene, Saponaria officinalis plant in E. coli and investigation of antibody titer in laboratory rat]. J Shahid Sadoughi Univ Med Sci; 2017. 24(12):1024-33. [Persian].
24. 23. Walsh MJ, Dodd JE, Hautbergue GM. Ribosome-inactivating proteins: Potent poisons and molecular tools. Virulence; 2013. 4(8):774-84.
25. 24. Schrot J, Weng A, Melzig MF. Ribosome-inactivating and related proteins. Toxins; 2015. 7(5):1556-615.
26. 25. Bagga S, Hosur M, Batra JK. Cytotoxicity of ribosome‐inactivating protein saporin is not mediated through α2‐macroglobulin receptor. FEBS Lett; 2003. 541(1-3):16-20.
27. 26. Bergamaschi G, Perfetti V, Tonon L, Novella A, Lucotti C, Danova M, et al. Saporin, a ribosome‐inactivating protein used to prepare immunotoxins, induces cell death via apoptosis. Br J Haematol; 1996. 93(4):789-94.
28. 27. Bolognesi A, Tazzari PL, Olivieri F, Polito L, Falini B, Stirpe F. Induction of apoptosis by ribosome‐inactivating proteins and related immunotoxins. Int J Cancer; 1996. 68(3):349-55.
29. 28. Mir LM, Banoun H, Paoletti C. Introduction of definite amounts of nonpermeant molecules into living cells after electropermeabilization: direct access to the cytosol. Exp Cell Res; 1988. 175(1):15-25.
30. 29. Kodama T, Doukas AG, Hamblin MR. Delivery of ribosome-inactivating protein toxin into cancer cells with shock waves. Cancer Lett; 2003. 189(1):69-75.
31. 30. Selbo P, Kristian al, Høgset A, Prasmickaite L, Berg K. Photochemical internalisation: a novel drug delivery system. Tumor Biol; 2002. 23(2):103-12.
32. 31. Stirpe F. Ribosome-inactivating proteins. Toxicon; 2004. 44(4):371-83.

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA code

ارسال پیام به نویسنده مسئول


کلیه حقوق این وب سایت متعلق به مجله علوم پزشکی رازی می باشد.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق

© 2019 All Rights Reserved | Razi Journal of Medical Sciences

Designed & Developed by : Yektaweb