Razi Journal of Medical Sciences

fa شناسایی نشانگرهای زیستی برای تشخیص کارسینوم هپاتوسلولار و بیان ژن X ویروس هپاتیت B در باکتری E.coli" Identification of biomarkers for diagnosis of hepatocellular carcinoma and expression of hepatitis B virus X gene in E.coli bacteria. داروسازی Pharmacy پژوهشي Research HCC (هپاتوسلولار کارسینوما) مرتبط با ویروس هپاتیت B (HBV) یکی از بدخیمی های مهم با مرگ و میر بالا در سراسر جهان است. HCC اکثر قریب به اتفاق سرطان کبد (تقریباً 90٪) را تشکیل می‌دهد. پروتئین X ویروس هپاتیت B (HBx)، یک عامل مهم اتیولوژیک HCC مرتبط با HBV است. بیشتر شواهد موجود ارتباط بین حضور HBx و ایجاد HCC را نشان می‌دهد. سالانه حدود 1 میلیون نفر بر اثر سیروز و HCC ثانویه به عفونت HBV می‌میرند. واکسیناسیون هپاتیت B نوزادان از سال 1372 در ایران صورت گرفت که قبل از آن شیوع هپاتیت B در ایران 2-5% بود. و پس از واکسیناسیون این آمار به 2% تقلیل یافته است. در سال 1397، 1400000 نفر در کشور مبتلا به هپاتیت B بودند. در ایران 80% موارد مبتلا به سرطان کبد دارای سابقه بیماری هپاتیت B می‌باشند. کمتر از 1/3 بیمارانی با تشخیص HCC با روش‌های موجود درمان می‌شوند. بنابراین تشخیص HCC در مراحل اولیه برای بقای بیمار حیاتی و شناسایی نشانگرهای زیستی برای تشخیص زودهنگام HCC یک ضرورت به شمار می آید. به این منظور در این پژوهش پروتئین‌های مشترک موثر در HCC و پروتئین‌های که با پروتئین X ویروس هپاتیت B برهمکنش دارند با استفاده از مقالات و پایگاه‌های داده، شناسایی شدند و شبکه برهمکنشی پروتئین - پروتئین (PPI) میان آن‌ها با استفاده از نرم‌افزار Cytoscape3.7.1 ترسیم گردید. سپس از با استفاده از افزونه Centiscape پروتئین‌های hub در این شبکه مشخص شدند.TP53، HSP90AB1، HSPB1، PIN1، HIF1A و HSPA4 پروتئین‌های مهم شبکه‌اند. 4 مسیر بیولوژیکی این پروتئین‌های hub با استفاده از نرم-افزارFunrich3.1.3 تعیین شد. 100% این پروتئین‌ها در مسیر VEGF and VEGFR signaling network نقش داشتند و 80% پروتئین‌ها درمسیر ErbB receptor signaling network، Insulin Pathway، Class I PI3K signaling events نقش داشتند. با توجه به نقش پروتئین X ویروس هپاتیت B در پیشروی بیماری HCC، طراحی پرایمر برای ژن X انجام شد و قطعه مورد نظر از طریق PCR به دست آمد. در مرحله بعد اتصال قطعه مورد نظر به پلازمید بیانی pET-M33 و با استفاده از کلنی PCR اتصال قطعه مدنظر به پلازمید تایید شد. قطعه پروتئین به صورت هترولوگ در E. coli BL21(DE3) بیان شد و حضور پروتئین مورد نظر توسط SDS-PAGE تایید شد. پس از تایید بیان پروتئین، خالص سازی آن به وسیله ستون Ni2 + - NTA انجام شد.   Hepatitis B virus (HBV)-related HCC (hepatocellular carcinoma) is one of the most important malignancies with high mortality worldwide. HCC accounts for the vast majority of liver cancers (approximately 90%). Hepatitis B virus X (HBx) protein is an important etiological agent of HBV-related HCC. Most of the available evidence shows the relationship between the presence of HBx and the development of HCC. About 1 million people die annually due to cirrhosis and HCC secondary to HBV infection. Hepatitis B vaccination of newborns took place in Iran since 1372, and before that the prevalence of hepatitis B in Iran was 2-5%. And after vaccination, this number has been reduced to 2%. In 2017, 1,400,000 people in the country were infected with hepatitis B. In Iran, 80% of liver cancer cases have a history of hepatitis B. Less than 1/3 of patients diagnosed with HCC are treated with existing methods. Therefore, the diagnosis of HCC in the early stages is vital for the patient's survival and the identification of biomarkers for the early diagnosis of HCC is a necessity. For this purpose, in this research, common proteins effective in HCC and proteins that interact with hepatitis B virus X protein were identified using articles and databases, and the protein-protein interaction (PPI) network between them was determined using Cytoscape 3.7.1 software. was drawn Then, using the Centiscape plugin, the hub proteins in this network were identified. TP53, HSP90AB1, HSPB1, PIN1, HIF1A and HSPA4 are the important proteins of the network. 4 biological pathways of these hub proteins were determined using Funrich 3.1.3 software. 100% of these proteins were involved in VEGF and VEGFR signaling network and 80% of proteins were involved in ErbB receptor signaling network, Insulin Pathway, Class I PI3K signaling events. Considering the role of hepatitis B virus X protein in the progression of HCC disease, primer design was done for the X gene and the desired fragment was obtained through PCR. In the next step, the attachment of the desired fragment to the pET-M33 expression plasmid was confirmed by using PCR colony to connect the desired fragment to the plasmid. The protein fragment was heterologously expressed in E. coli BL21(DE3) and the presence of the target protein was confirmed by SDS-PAGE. After confirming the expression of the protein, its purification by Ni2 column + - NTA done   نشانگرهای زیستی, کارسینوم هپاتوسلولار, بیان ژن, ویروس هپاتیت B , باکتری E.coli biomarkers, hepatocellular carcinoma, gene expression, hepatitis B virus, E.coli bacteria 1 12 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-8213-1&slc_lang=fa&sid=1 Saeed Kiani سعید کیانی modafe.1400mmmm@gmail.com 3900319475328460090670 3900319475328460090670 Yes Master of Pharmaceutical Chemistry, Zagros Institute of Higher Education, Kermanshah, Iran. کارشناس ارشد شیمی دارویی، موسسه آموزش عالی زاگرس، کرمانشاه، ایران