fa بررسی مولکولی فعالیت پروتئولیتیکی پروتئین 3C در پاراکو ویروس انسانی تیپ یک بیولوژی (زیست شناسی) Biology پژوهشي Research <p></p><p>    زمینه و هدف: پاراکوویروس‌های انسانی، جزء خانواده پیکورنا ویروس‌ها می‌باشند که از نظر کلینیکی حائز اهمیت هستند. اخیراً بررسی توالی ژنوم پاراکوویروس تیپ یک نشان داده است که این ویروس، از پیکورنا ویروس‌های دیگر متفاوت بوده و فاقد موتیفی است که در فعالیت پروتئازی 2A دخالت دارد. هدف از انجام این مطالعه، بررسی فعالیت پروتئولیتیکی پروتئین 3C در پاراکو ویروس انسانی تیپ یک می‌باشد. روش بررسی: این مطالعه از نوع بنیادی کاربردی می‌باشد. ناحیه کد کننده پروتئین 3C از cDNA(Complementary DNA) تهیه شده از ژنوم پاراکو ویروس انسانی تیپ یک، با آنزیم لیگاز در پلاسمید pUBS(Expression plasmid vector) وارد شد و پلاسمید نوترکیب pFG3(Plasmid Farideh Ghazi) تهیه گردید. پس از انتقال پلاسمید و تکثیر آن در باکتری E.coli MC10.22، به طریق استخراج با فنل، DNA جدا شد و سپس در سیستم پروکاریوتی(E.coli BL21) و روش درون لوله‌ای(In vitro)، تحت پروموتور T7 بیان گردید. نتایج با SDS-PAGE(Sodium dodecyl sulfate-Polyacrylamid gel electrophoresis) بررسی شد. یافته‌ها: با بررسی محصول بیان پلاسمید نوترکیب فاقد ژن 3C در هر دو سیستم پروکاریوتی و In vitro، فقط یک باند بزرگ در حدود 90 کیلو دالتون مشاهده گردید. در صورتی که وقتی محصول بیان پلاسمید نوترکیب حاوی 3C در هر دو سیستم توسط پلی‌آکریل آمید ژل بررسی شد، بجای یک باند بزرگ، چندین باند کوچک مشاهده شد که دلالت بر خاصیت پروتئازی پروتئین 3C می‌کند. در ضمن وقتی آنتی‌پروتئاز به محصول پلاسمید حاوی ژن 3C اضافه گردید، نتیجه، مشابه محصولات حاصل از بیان پلاسمید فاقد ژن 3C بود. نتیجه‌گیری: نتایج نشان داد که پاراکوویروس‌های انسانی تیپ یک، از نظر فعالیت پروتئولیتیکی، متفاوت از دیگر پیکورنا ویروس‌ها می‌باشند و در این ویروس‌ها، فقط پروتئین 3C دارای خاصیت پروتئازی بوده و کلیه کلیواژهای پلی پروتئین اولیه ویروس توسط این پروتئاز انجام می‌شود. </p> <p></p><p>    Background & Aim: Human parechovirus is a genus of picornaviruses which includes a number of important viruses of clinical significance. Recent sequence analysis suggests that human parechovirus type 1(HPEV-1) is distinct from other picornaviruses and lacks the motives believed to be involved in the protease function of 2A. The aim of this study was to analyse proteolytic activity of 3C protein in human parechovirus type 1. Materials and Method: The region of HPEV-1 cDNA that was coded for 3C protein was inserted into plasmid pUBS by Ligase enzyme and pFG3 recombinant plasmid was prepared. After transformation and replication of this plasmid in E.coli MC 10.22, DNA was isolated by phenol extraction and then expressed in prokaryotic(E.coli BL-21) and in vitro systems under T7 promoter. The results were detected by SDS-PAGE and analyzed. Results: The products of expression of recombinant plasmid(not included 3C gene) in both prokaryotic and in vitro systems were analyzed. Just one large band(90 KD) was observed, but with plasmid including 3C gene, several small bands were detected. These results indicated proteolytic activity of 3C protein. After addition of anti protease to the products of plasmid with 3C gene the result was the same as the plasmid without 3C gene. Conclusion: The results showed that HPEV-1 has a processing strategy different from other members of picornaviruses, and 3C protein seems to be the only virus encoded protease that can catalyze cleavages of all sites in the parechoviruses primery polyprotein. </p> 1 – پیکورنا ویروس‌ها 2 – پاراکو ویروس‌های انسانی 3 – پروتئاز 3C 4 – بیان ژن 1) Picornaviruses 2) Human Parechoviruses 3) 3C Protease 4) Gene Expression 159 166 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-738&slc_lang=fa&sid=1 F Ghazi فریده قاضی 3900319475328460017184 3900319475328460017184 Yes A.A Gorzin علی‌اکبر گرزین 3900319475328460017185 3900319475328460017185 No M Shahrabadi محمود شمس شهرآبادی 3900319475328460017186 3900319475328460017186 No B Dabirmanesh بهاره دبیرمنش 3900319475328460017187 3900319475328460017187 No