fa تهیه و خالص‌سازی آنتی‌ژن‌های کرم بالغ فاسیولاهپاتیکا جهت تشخیص فاسیولیازیس انگل‌شناسی parasitology پژوهشي Research <p></p><p>    زمینه و هدف: فاسیولیازیس، یکی از بیماری‌های مهم انگلی انسان و دام است که توسط گونه‌های فاسیولا در میزبان ایجاد می‌شود. تقریباً 4/2 میلیون نفر در جهان به این انگل مبتلا هستند و 180 میلیون نفر، در معرض خطر ابتلا هستند. تشخیص بموقع و درمان سریع آن، از بروز عوارض بیماری در مبتلایان بطور چشمگیری جلوگیری می‌نماید. به همین جهت در مطالعه حاضر نسبت به جداسازی، خالص‌سازی و ارزیابی آنتی‌ژن مناسب و بکارگیری آن در روشهای سرولوژیک حساس و اختصاصی اقدام شد. روش بررسی: در این مطالعــه، ابتدا کرمهای سالم جمع‌آوری شدند، سپس کوتیکول و سایر ارگان‌های آنها تفکیک شده، آنگاه به صورت جداگانه، هموژنیزه وسونیکه شدند. میزان پروتئین آنها به روش برادفورد اندازه‌گیری شده و کلیه نمونه‌ها، تغلیظ شدند و بر روی ستــون ژل کروماتوگرافی(سفادکس G200) بــرده شدنــد. برای هر قسمت، 4 جزء آنتی‌ژنیک دریافت شد. آنگاه با اولترافیلتراسیــون پروتئیــن، نمونه‌ها به میــزان مناسب رسانــده شدنــد. با آنتی‌ژن بدست آمده، 36 راس خرگوش مصون شدند، آنتی سرم بدست آمده از خرگوش‌ها به همراه 30 نمونه سرم انسان مشکوک به ابتلاء به فاسیولیازیس، به روش CIEP(Counterimmuno-electrophoresis) آزمایش شدند. در این مطالعه، آنتی‌ژن جزء 2(Fraction 2) کوتیکول فاسیولا هپاتیکا، حساسیــت 9/90% و اختصاصیــت 4/94% را در تســت CIEP نشــان داد. آنگاه آنتی‌ژن مذکور با روش SDS-PAGE(sodium dodecyl sulphate-polyacryl amide) شناسایی شد که تنها یک باند مشخص 60 کیلودالتونی داشت؛ در طول ژل، باند دیگری مشخص نگردید؛ این آنتی‌ژن، با روش الایزا مورد آزمایش قرار گرفت. در این روش، آنتی‌بادی در نمونه سرم 26 نفر از 30 انسان و همه 36 راس خرگوش، قابل تشخیص و اندازه‌گیری بود. نوع مطالعه، راه‌اندازی یک روش یا سیستم علمی بود که تجزیه و تحلیل اطلاعات آن با استفاده از آزمون همبستگی به روشspss انجام شد. یافته‌ها: در مجموع با روش CIEP، از مجموع 66 نمونه سرم(30 نمونه سرم انسان و 36 نمونه سرم خرگوش)، در 60 مورد (آنتی‌ژن حاصل از کوتیکول فاسیولا هپاتیکا) واکنش رسوبی مثبت مشاهده گردید، در حالی که با روش الایزا، 62 نمونه سرم از 66 نمونه، جواب مثبت داشته است. نتیجه‌گیری: بنابراین استفاده از آنتی‌ژن 60 کیلودالتونی کوتیکول کرم فاسیولا به عنوان آنتی‌ژن خالص، در تستهای سرولوژیک CIEP والایزا توصیه می‌شود. نتایج حاصل، بیانگر حساسیت بالای روش الایزا نسبت به روش CIEP می‌باشد. </p> <p></p><p>    Background & Aim: Fascioliasis as a zoonosis is one of the important parasitic diseases which is caused when fasciola species enter the host’s body. Approximately 2.4 million people throughout the world are infected with this parasite and 180 million people are vulnerable to it. On time diagnosis and rapid treatment of the disease can substantially prevent the harmful effects of the infection on patients. In the present study, we have tried to separate, purify and assess a useful antigen and apply it as a sensitive and specific serologic method. Material & Method: In this experiment, first healthy worms were collected and then cuticles and the other organs of them were detached, homogenized and sonicated separately. Their levels of protein were measured by Bradford method. Then, all the samples were thickened and put on chromatography gel column(G200 sephadex). Four antigenic reactions for each part were observed. By using ultrafiltration method, the protein level of the samples was adjusted to a suitable level so that the obtained antigen could be used to immunize 36 rabbits. The antibodies taken from the rabbits as well as 30 samples of human sera with fascioliasis were tested with CIEP method. In the present study, fraction 2 antigen of fasciola hepatica’s cuticles showed 90.9% sensitivity and 94.4% specificity in CIEP test. The above-mentioned antigen which was identified by SDS-PAGE method had one distinct band of 60 KD, and no other band was recognized along the gel. This antigen, then, went under experiment by ELISA method which revealed that the antibody in 26 out of 30 samples of human sera and all 36 rabbits was detectable and measurable. Results: Altogether, 60 samples out of 66 including 30 human sera and 36 rabbit sera showed positive sedimentary reaction in CIEP method whereas 62 samples did so in ELISA method. Conclusion: Therefore, it is suggested that 60 KD antigen of fasciola worm’s cuticles be used as a pure antigen in serologic tests such as ELISA and CIEP. However, the results indicate high sensitivity of ELISA method to CIEP method. </p> 1 – خالص‌سازی 2 – آنتی‌ژن 3 – فاسیولا هپاتیکا 4 – فاسیولیازیس 1) Purification 2) Antigen 3) Fasciola Hepatica 4) Fascioliasis 157 166 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-714&slc_lang=fa&sid=1 F Maleki فاطمه ملکی 3900319475328460017112 3900319475328460017112 Yes S Sadegh Hassani صفورا صادق‌حسنی 3900319475328460017113 3900319475328460017113 No