Razi Journal of Medical Sciences
مجله علوم پزشکی رازی
RJMS
Medical Sciences
http://rjms.iums.ac.ir
39
journal39
2228-7043
2228-7051
en
jalali
1399
10
1
gregorian
2021
1
1
27
11
online
1
fulltext
fa
بررسی جهشهای پیش از درمان منجر به مقاومت در برابر داروهای مهارکننده مستقیم ویروس هپاتیت سی در بیماران مبتلا به هپاتیت سی مزمن
Detection of Pre-treatment mutations leading to resistance to direct hepatitis C virus blocking drugs in patients with chronic hepatitis C
بیماریهای عفونی
Infectious Disease
پژوهشي
Research
<strong><span style="color:#0070c0;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">زمینه و هدف:</span></span></span></strong> <span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">ویروس هپاتیت سی تنها میزبان آن انسان میباشد. در کشور ما ژنوتیپهای </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">1a</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">3a</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">1b</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> شایعترین ژنوتیپها هستند. هدف از این پژوهش تعیین فراوانی بروز جهشهای مقاوم به دارو در نواحی </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">NS5A</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">NS5B</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> که هدف دارو های جدید ضد ویروس هپاتیت </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">C</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> هستند در بیماران مبتلا به هپاتیت سی مزمن با ژنوتیپ </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">1b </span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> بود که با این داروها تحت درمان قرار داشتند. </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;"></span></span></span></span><br>
<strong><span style="color:#0070c0;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">روش­</span></span></span></strong> <strong><span style="color:#0070c0;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">کار:</span></span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در این پژوهش تعداد 29</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">بیمارشرکت داوطلبانه داشتند که مبتلا به هپاتیت سی مزمن با ژنوتایپ </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">1b</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> بودند و سابقه درمان ناموفق با ریباورین و انترفرون داشتند ولی از نظر درمان با داروهای مستقیم الاثر مورد بررسی در این طرح "بکر یا </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">native</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">" محسوب می</span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">­</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">شدند. ژنوم ویروس از نمونه سرم بیماران با استفاده از کیت استخراج </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">RNA</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">ی ویروسی شرکت </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Roche</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> استخراج شد.</span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> RT-PCR </span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">و </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">nested PCR</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> با</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">استفاده از کیت تاکارا و پرایمرهای اختصاصی خارجی و داخلی نواحی هدف بطور جداگانه انجام گردید. سپس محصولات تعیین توالی شد و نتایج توسط نرم افزار </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Bio Edit</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> ورژن (7.9.5.3) بررسی شد. سپس با استفاده از نرم افزار </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CLUSTAL W</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در نرم افزار </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">MEGA</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> ورژن (6) هم ترازی توالی ها (</span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Multiple Sequencing</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">) صورت پذیرفت. </span></span></span><br>
<strong><span style="color:#0070c0;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته ­ها:</span></span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> تجزیه و تحلیل توالی</span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">­</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">های هدف به­منظورشناسایی جهش های مقاوم به داروهای مورد بررسی، بروز این جهش­ها را در برابر دو داروی داکلاتاسویر و لدیپاسویر در 5 بیمار (24/17%) نشان داد. هرچند به­دلیل عدم وقوع جهش­های مقاوم به داروی سوفوسبوویر در ناحیه </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">NS5B</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، تمام بیماران به درمان ضد ویروسی پاسخ دادند و این پاسخ در پیگیری­های بعدی نیز پایدار بود. </span></span></span><br>
<strong><span dir="RTL"><span style="color:#0070c0;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه گیری:</span></span></span></span></strong><span dir="RTL"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> استفاده از داروی سوفوسبوویر در درمان بیماران مبتلا به هپاتیت سی مزمن با ژنوتایپ </span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">1b</span></span></span><span dir="RTL"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> که سختترین ژنوتایپ این ویروس از نظر پاسخ به درمان­های ضد ویروسی است با نتایج بسیار امیدوارکننده ­ای همراه بود و علیرغم شناسایی جهش­های مقاوم به داروهای داکلاتاسویر و لدیپاسویر، استفاده از سوفوسبوویر به درمان قطعی بیماران انجامید. هرچند بدلیل ماهیت جهش پذیری ویروس پایش روند بروز جهش­های احتمالی که ممکن است منجر به مقاومت در برابر سوفوبوویر شود تا حذف ویروس از کشور بسیار ضروری است. </span></span></span></span>
<strong>Background and objective: </strong>Human is the only host of hepatitis C virus. This virus has a positive single stranded RNA and lipoprotein envelop that has 7 confirmed genotypes. According to studies, genotypes 1a, 3a and 1b are the most common genotypes in Iran. No effective vaccine against HCV infection has been developed instead, advances in antiviral treatment using drugs that directly affect specific viral genomic regions to inhibit virus replication have promising results, particularly in the treatment of genotype 1 of HCV virus as a hard to treat genotype. These drugs have been used in our country for few years to treat patients with chronic hepatitis C infection so, according to the mutation prone characteristic of HCV genome which could be resulted in drug resistance monitoring of their effectiveness for early detection of resistant mutations has the great importance<span dir="RTL">.</span>The aim of this study was to determine the frequency of drug resistant mutations in NS5A and NS5B regions as targets of new hepatitis C antiviral drugs in patients with chronic HCV-1b infection who were under treatment with these drugs<span dir="RTL">.</span><br>
<strong>Methods:</strong> In this study, there were 29 volunteers with chronic HCV-1b infection who had failed to be treated with ribavirin and interferon but were considered “naïve” to direct acting anti-viral drugs. Viral genome was extracted from blood samples using Roche Viral RNA Extraction Kit. RT-PCR and nested PCR was performed by using specific external and internal primers separately by using the TaKaRa kit. The PCR products were sequenced and the results were verified by Bio Edit software version (7.9.5.3). Multiple alignment was performed by using CLUSTAL W software in MEGA version (6<span dir="RTL">(.</span><br>
<strong>Results: </strong>Resistance mutations against anti HCV drugs in this study were identified in 5 (17.24%) patients out of 29 patients against daclatasvir and ledipasvir drugs. However, all patients responded to anti-HCV therapy due to the absence of resistant mutations in NS5b region that is the viral genomic target region of sofosbovir, and this response was sustained at follow-up<span dir="RTL">.</span><br>
<strong>Conclusion: </strong>Use of Sofosbuvir in treatment of patients with chronic HCV-1b infection which is the most difficult to treat HCV genotypes, was very promising. Despite identification of resistant mutations against Daclatasvir and Ledipasvir the use of Sofosbuvir resulted in complete treatment of patients. However, due to the mutable nature of the virus, monitoring of occurrence of possible resistant mutations against Sofosbuvir is necessary to achieve HCV elimination in our country<span dir="RTL">.</span>
هپاتیت C, ژنوتایپ 1b, داکلاتاسویر, لدیپاسیور, سوفوسبوویر.
Hepatitis C virus, Genotype 1b, Daclatasvir, Ledipasvir, Sofosbuvir
15
24
http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4891-1&slc_lang=fa&sid=1
Razieh
Amini
راضیه
امینی
razieamini250@yahoo.com
3900319475328460056318
3900319475328460056318
No
Pooneh
Rahimi
پونه
رحیمی
pooneh5376@yahoo.com
3900319475328460056317
3900319475328460056317
Yes
Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran
، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران