fa جداسازی وزیکول‎های ترشحی غشاء خارجی باکتری اشرشیاکلی با استفاده از فیلتراسیون با جریان مماسی میکروبیولوژی Microbiology پژوهشي Research <p dir="RTL"><strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">زمینه و هدف</span></span></strong>: <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">وزیکول</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&lrm;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">های غشاء خارجی باکتری</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&lrm;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">ها نقش مهمی در فیزیولوژی، بیماری زایی و تعامل بین میزبان و عامل بیماریزا دارند. این وزیکول</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&lrm;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">ها به باکتری اجازه می دهند تا آنزیم‌ها و محتویات خود را به شکل محافظت شده منتقل کنند و در زنده ماندن باکتری نقش دارند. از آنجایی که آن‌ها به عنوان نماینده باکتری محسوب می شوند، مطالعه آن‌ها به شناخت بیشتر باکتری</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&lrm;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">ها و تعامل آن‌ها با محیط کمک می‌کند. از این رو روش</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&lrm;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">های جداسازی این وزیکول‌ها اهمیت ویژه‌ای دارد. لذا، هدف از این پژوهش، معرفی روشی نوین برای جداسازی وزیکول</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&lrm;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">های غشاء خارجی باکتری اشرشیاکلی است.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">روش کار</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">: در روش شناسی حاضر، باکتری اشرشیاکلی انتروتوکسیژنیک در شرایط استاندارد کشت داده شد. سپس مایع رویی کشت جدا گردید و از فیلتراسیون با جریان مماسی برای تغلیظ وزیکول</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&lrm;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">ها و سانتریفیوژ دور بالا برای رسوب‌دهی آن‌ها استفاده شد. وزیکول</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&lrm;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">های جدا شده توسط میکروسکوپ الکترونی عبوری تایید و وزن مولکولی و میزان غلظت پروتئینی مشخص گردید.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته‌ها</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">: ریخت شناسی وزیکول‌ها توسط میکروسکوپ الکترونی تایید و اندازه آن‌ها بین 50 تا 100 نانومتر تعیین شد. الگوی الکتروفورتیک نشان دهنده باندهای قوی و ضعیف در ناحیه بین 41-22 کیلودالتون بوده و غلظت پروتئین وزیکول</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&lrm;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">های تخلیص شده 542 میکروگرم مشخص گردید.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه‌گیری</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">: نتایج به دست آمده نشان می‌دهد که در نتیجه استفاده از روش ارائه شده در این مطالعه علاوه بر ارائه محصولی همسان، از بعد اقتصادی و زمانی نسبت به روش</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">&lrm;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">های رایج مزایای مثبتی دارد و می‌تواند زمینه ساز جداسازی این وزیکول‌ها در سطح صنعتی نیز باشد.</span></span><br> &nbsp;</p> <p style="margin: 0in 0in 8pt; text-align: justify;"><font color="#000000"><font face="Calibri"><b><span b="" style="line-height: 107%; font-size: 12pt; mso-bidi-language: FA;">Background</span></b><span b="" style="mso-bidi-language: FA;"><font size="3">: Among pathogenic bacteria, Gram-negative bacteria are more important. The secreting outer membrane vesicles of the bacteria are important role in physiology, virulence, and the interaction between host and pathogen. These vesicles allow bacteria to transmit enzyme and its contents as conserved form and also these involved in viability. Since they are represented as bacteria candidate, study of them can be help to learn more about bacteria and their interaction with the environment.</font></span></font><font size="3"><span b="" dir="RTL" style="font-family:;"> </span><span b="" style="mso-bidi-language: FA;"><font face="Calibri">Therefore, the isolation methods of vesicles are important. So, the aim of this study was to introduce a new method for isolation of Escherichia coli outer membrane vesicles.</font></span></font></font></p> <p style="margin: 0in 0in 8pt; text-align: justify;"><font face="Calibri"><font color="#000000"><b><span b="" style="line-height: 107%; font-size: 12pt; mso-bidi-language: FA;">Methods: </span></b><span b="" style="mso-bidi-language: FA;"><font size="3">The bacteria of Enterotoxigenic Escherichia coli were cultured under standard conditions. Supernatant was removed and then the tangential- trans flow filtration was used for concentrating vesicles, after that high speed centrifuges were used for obtaining the deposition. Isolated vesicles confirmed by transmission electron microscopy and molecular weight of the protein concentration was determined.</font></span></font></font></p> <p style="margin: 0in 0in 8pt; text-align: justify;"><font face="Calibri"><font color="#000000"><b><span b="" style="line-height: 107%; font-size: 12pt; mso-bidi-language: FA;">Results: </span></b><span b="" style="mso-bidi-language: FA;"><font size="3">Vesicle morphology was confirmed by transmission electron microscopy and size of vesicles were determined between 50 to 100 nanometers. Electrophoretic pattern reflects the strong and weak bands in the region between 22-41 kDa and concentration of protein was determined 542 micrograms. </font></span></font></font></p> <p style="margin: 0in 0in 8pt; text-align: justify;"><font face="Calibri"><font color="#000000"><b><span b="" style="line-height: 107%; font-size: 12pt; mso-bidi-language: FA;">Conclusion: </span></b><span b="" style="mso-bidi-language: FA;"><font size="3">In the present study these results shows that the use of this method, in addition to provide same product, had positive benefits from time and economic perspective in compare to common procedure and It can also use to isolate the vesicles at the industrial level.</font></span></font></font></p> وزیکول های ترشحی غشاء خارجی, فیلتراسیون با جریان مماسی, باکتری اشرشیاکلی Secretory outer membrane vesicles, tangential- trans flow filtration, Escherichia coli 8 14 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3251-1&slc_lang=fa&sid=1 Babak Beikzadeh بابک بیک زاده bbeikzadeh@ut.ac.ir 3900319475328460036982 3900319475328460036982 No University of Tehran, Tehran, Iran دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، تهران، ایران gholamreza Nikbakht Brujeni غلامرضا نیکبخت بروجنی nikbakht@ut.ac.ir 3900319475328460036983 3900319475328460036983 Yes University of Tehran, Tehran, Iran دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، تهران، ایران Zohre Eftekhari زهره افتخاری eftekharivet@gmail.com 3900319475328460036984 3900319475328460036984 No Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Ahmad Erfanmanesh احمد عرفانمنش erfanmanesh@yahoo.com 3900319475328460036985 3900319475328460036985 No University of Tehran, Tehran, Iran دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران