fa بررسی بیان ژنهای CXCL8 ، CCL4 ، CCL3 در نوتروفیل های مواجهه یافته با انگل لیشمانیا اینفانتوم در محیط کشت سلولی میکروبیولوژی Microbiology پژوهشي Research <p dir="RTL"><strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">زمینه و هدف</span></span></strong>: <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">مطالعات مختلف نشان می‌دهند که نوتروفیل‌ها در اثر محرک‌های انگلی می‌توانند کموکاین‌های مختلف تولید</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">کنند. این کموکاین‌ها باعث فراخوانی لوکوسیت‌ها، لنفوسیت‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">T</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، سلول‌های دندریتیکی، مونوسیت‌ها، سلول‌های کشنده طبیعی و نوتروفیل‌ها به محل عفونت می‌شوند. هدف از این مطالعه بررسی بیان ژن‌های  </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CXCL8</span></span></span></em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CCL4</span></span></span></em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CCL3</span></span></span></em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در نوتروفیل‌های مواجهه یافته با انگل لیشمانیا اینفانتوم می‌باشد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">روش کار</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">: طی این مطالعه تجربی-آزمایشگاهی از 30 فرد سالم خونگیری شد و نوتروفیل‌های خون محیطی با استفاده از</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">روش هیستوپاک -1077، دکستران و سانتریفیوژ جدا شدند. پس از انجام آزمون تعیین درصد زنده بودن و خلوص، سلول‌ها شمارش شدند. سپس این سلول‌ها با اشکال پروماستیگوت انگل لیشمانیا اینفانتوم که از بخش ایمونولوژی انستیتو پاستور تهیه شده بود، در فاز ایستا مجاور شد و در انکوباتور </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CO₂</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> به مدت یک ساعت انکوبه شد، نوتروفیل‌های تحریک نشده به عنوان شاهد استفاده شدند. پس از استخراج </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">RNA</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">RNA</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> توسط مجموعه آنزیمی به </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">cDNA</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> تبدیل شد. از </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">cDNA</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> برای انجام </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Real Time PCR</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> استفاده شد. ژن‌های انتخاب شده، ژن کموکاین‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CCL3</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CCL4</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CXCL8</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> بوده و از </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">β –Actin</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> هم به عنوان ژن رفرانس استفاده شد</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">و سپس توسط</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">روش آماری </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">ANOVA</span></span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">تغییر بیان ژن ها بررسی شد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته‌ها</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">:</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">نتایج این تحقیق نشان دادند که بیان ژن </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CXCL8</span></span></span></em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در نوتروفیل‌های مواجهه یافته با انگل لیشمانیا دچار افزایش معنا دار نسبت به نوتروفیل‌های شاهد گردید (001/0 </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">p<</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">). از سویی بیان ژن‌های </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CCL3</span></span></span></em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CCL4</span></span></span></em><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در نوتروفیل‌های مواجهه با انگل لیشمانیا نسبت به نوتروفیل‌های شاهد بیانگر تغییر معنا‌داری نگردید.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه‌گیری</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">: نتایج این مطالعه نشان می‌دهد که مواجهه با انگل لیشمانیا سبب تغییری در بیان</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;"> mRNA</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> ژن‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CCL3,CCL4</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> در میان نوتروفیل‌های تحریک شده مشاهده نگردید اما باعث افزایش بیان بالایی از </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CXCL8</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> گردید. بر این مبنا، اندازه‌گیری بیان ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CXCL8</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"> می‌تواند به عنوان معیاری جهت تشخیص ابتلا به انگل لیشمانیا مطرح باشد.</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;"></span></span></span><br>  </p> <p></p> <p><strong>Background</strong>: Studies have shown that neutrophils in effect by parasitic triggers can produce many different chemokines.These chemokines are called leukocytes,T lymphocytes, dendritic cells, monocytes, lethal cells and neutrophils to the site of infection. The aim of this study is to investigate the expression of neutrophils exposure with <em>leishmania infantum</em>.<br> <strong>Methods</strong>: During this experimental-laboratorial study the blood was collected from 30 healthy individuals. Peripheral blood neutrophils were isolated by HYSTOPAQUE 1077, dextran and centrifuge. Then cells were exposed to the promastigote forms of the <em>Leishmania infantum </em>parasite, which was prepared from the immunology department of the Pasteur Institute in stationary phase and was incubated for one hour in co₂ incubator, not stimulated neutrophils were used as control. After extracting RNA, RNA was converted to cDNA by enzyme complex. cDNA was used for Real Time PCR. Selected gene been gene of CCL3,CCL4 and CXCL8 chemokines and β-Actin was used as references gene and then gene expression change was evaluated by ANOVA statistical methods.<br> <strong>Results</strong>: The results indicated that CXCL8 gene expression were significantly increased in the face of leishmania compared to control neutrophils (p<0.001). On the other hand CCL3 and CCL4 genes expression weren’t significant change in the face of leishmania compared to the control neutrophils.<br> <strong>Conclusion</strong>: The results show that exposure with leishmania parasite caused no change in expression of CCL3 and CCL4 mRNA genes among of simulation neutrophilsbut lead to increases high expression of CXCL8. On this basis measuring of CXCL8 can consider as a criterion for detecting leishmania infection level.<br>  </p> <p></p> لیشمانیا , نوتروفیل , CCL3 , CCL4 , CXCL8 Leishmania , Neutrophils, CCL3, CCL4, CXCL8 35 42 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3172-2&slc_lang=fa&sid=1 Tahereh Naji طاهره ناجی najiitahere@yahoo.com 3900319475328460038724 3900319475328460038724 No Islamic Azad University (IAUPS), Tehran, Iran دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم دارویی ، تهران، ایران Arsalan Hematzadeh ارسلان همت زاده arsalanhematt@yahoo.com 3900319475328460038725 3900319475328460038725 No Islamic Azad University (IAUPS), Tehran, Iran دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم دارویی ، تهران، ایران Pooria Moulavi پوریا مولوی pooriamoulavi@yahoo.com 3900319475328460038726 3900319475328460038726 No Islamic Azad University of North Tehran, Tehran,Iran. دانشگاه آزاد اسلامی واحد تهران شمال ، تهران ، ایران Sanaz Noroozi ساناز نوروزی sayana.nrzi@gmail.com 3900319475328460038727 3900319475328460038727 No Islamic Azad University of Tonekabon Branch, Mazandaran, Iran دانشگاه آزاد اسلامی واحد تنکابن ، تنکابن ، ایران behrooz saberi بهروز صابری B3hr0oz.saberi@gmail.com 3900319475328460038728 3900319475328460038728 Yes Islamic Azad University of Tonekabon Branch, Mazandaran, Iran دانشگاه آزاد اسلامی واحد تنکابن ، تنکابن ، ایران