Razi Journal of Medical Sciences
مجله علوم پزشکی رازی
RJMS
Medical Sciences
http://rjms.iums.ac.ir
39
journal39
2228-7043
2228-7051
en
jalali
1394
5
1
gregorian
2015
8
1
22
134
online
1
fulltext
fa
کلونسازی، بیان و تخلیص پروتئین اینتگراز ویروس HIV و بررسی آنتیژنیسیته آن
Cloning, expression and purification of HIV integrase and evaluation of its antigenicity
بیماریهای عفونی
Infectious Disease
پژوهشي
Research
<p class="MsoNormal" dir="rtl" style="margin-bottom: 0.0001pt direction: rtl unicode-bidi: embed"><b><span lang="AR-SA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'">زمینه و هدف</span></b><span lang="AR-SA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'">: </span><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'">ارتقاء روشهای تشخیصی جهت شناسایی افراد آلوده به </span><span dir="ltr" style="font-size: 9pt line-height: 115% font-family: 'Times New Roman', serif">HIV</span><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'">، یکی از راههای مقابله با انتشار ویروس بهشمار میرود. بهدلیل بالابودن میزان موتاسیون در این ویروس، لازم است تا برای راهاندازی روشهای ایمنواسی تشخیصی از پروتئینهای محافظتشده، استفاده شود. بهدلیل آنکه پروتئین اینتگراز یکی از محافظتشدهترین پروتئینهای </span><span dir="ltr" style="font-size: 9pt line-height: 115% font-family: 'Times New Roman', serif">HIV</span><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'"> است، آنتیژن مناسبی برای این منظور بهشمار میرود. در این مطالعه ضمن کلونسازی و تخلیص این پروتئین، ایمنوژنیسیته آن نیز مورد بررسی قرار گرفته است.<!--stripped--><!--stripped--></span></p>
<p class="MsoNormal" dir="rtl" style="margin-bottom: 0.0001pt direction: rtl unicode-bidi: embed"><b><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'">روش کار</span></b><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'">: ژن اینتگراز در وکتور بیانی </span><span dir="ltr" style="font-size: 9pt line-height: 115% font-family: 'Times New Roman', serif">pET28a</span><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'"> کلون گردید. پلاسمید نوترکیب حاصله به باکتری </span><i><span dir="ltr" style="font-size: 9pt line-height: 115% font-family: 'Times New Roman', serif">E.coli</span></i><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'"> انتقال یافته و بیان پروتئین با استفاده از </span><span dir="ltr" style="font-size: 9pt line-height: 115% font-family: 'Times New Roman', serif">IPTG</span><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'"> القاء شد. بررسی ایمنوژنیسیته پروتئین بیانشده با تکنیک وسترنبلات صورت گرفت. تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی میل ترکیبی با رزینهای </span><span dir="ltr" style="font-size: 9pt line-height: 115% font-family: 'Times New Roman', serif">Ni-NTA</span><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'"> انجام پذیرفت.<!--stripped--><!--stripped--></span></p>
<p class="MsoNormal" dir="rtl" style="margin-bottom: 0.0001pt direction: rtl unicode-bidi: embed"><b><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'">یافتهها</span></b><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'">: القاء باکتریهای ترانسفرمشده با </span><span dir="ltr" style="font-size: 9pt line-height: 115% font-family: 'Times New Roman', serif">IPTG</span><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'"> به بیان پروتئین اینتگراز منجر گردید و به این ترتیب پس از بهینهسازی شرایط بیان، حدود 40 درصد پروتئینهای باکتریایی به پروتئین نوترکیب مورد نظر اختصاص پیدا کرد. انجام وسترن بلات نشاندهنده واکنش ایمنی اختصاصی با سرم افراد آلوده به </span><span dir="ltr" style="font-size: 9pt line-height: 115% font-family: 'Times New Roman', serif">HIV</span><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'"> بود. بهازاء هر یک لیتر کشت باکتری، 75 میلیگرم اینتگراز تخلیص گردید.</span><span dir="ltr" style="font-size: 9pt line-height: 115% font-family: 'Times New Roman', serif"><!--stripped--><!--stripped--></span></p>
<p class="MsoNormal" dir="rtl" style="margin-bottom: 0.0001pt direction: rtl unicode-bidi: embed"><b><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'">نتیجهگیری</span></b><span lang="FA" style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'B Mitra'">: پروتئین تولیدشده بهواسطه حفظ خاصیت آنتیژنیک خود، قابلیت بهکارگیری در روشهای تشخیصی ایمنواسی را دارد. با استفاده از بهینهسازی شرایط کشت و بیان پروتئین میتوان به باکتریهای نوترکیبی دست یافت که تولید پروتئین در آنها با بازده بالایی صورت میپذیرد و بنابراین امکان استفاده از آنها در اهداف صنعتی وجود خواهد داشت.<!--stripped--><!--stripped--></span></p>
<p dir="ltr"><strong>Background</strong>: Improving the performance of HIV diagnosis assays is one of the most important ways to reduce HIV transmission. Because of the high mutation rate of HIV, it is critical to use the conserved proteins to develop diagnostic immunoassay methods. Because integrase is one of the most conserved proteins of HIV, it may be a good target for this purpose. In this paper cloning, purification and immunogenicity evaluation of integrase are studied.</p>
<p dir="ltr"><strong>Methods</strong>: Integrase coding sequence was cloned in pET28a expression vector. After transformation of recombinant plasmid to E. coli, protein expression was induced by IPTG. Immunogenicity of recombinant integrase was evaluated by western blotting. The protein was purified by Ni-NTA affinity chromatography.</p>
<p dir="ltr"><strong>Results</strong>: Induction by IPTG leads to expression of integrase. The expression level after optimization of conditions was about 40% of total proteins of E. coli. Western blotting showed specific immunoreactivity of recombinant integrase to HIV infected sera. The yield of produced protein was 75 mg per one liter of bacterial culture.</p>
<p dir="ltr"><strong>Conclusion</strong>: The produced protein retains antigenic properties and can be used in diagnostic immunoassay methods. Optimization of culture and protein expression conditions results in recombinant bacteria producing high yields of protein which may be used in industrial purposes.</p>
Human immunodeficiency virus, Integrase, Immunoassay
59
67
http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-1693&slc_lang=fa&sid=1
زهرا
ریختهگران تهرانی
3900319475328460030204
3900319475328460030204
No
انستیتو پاستور ایران
کیهان
آزادمنش
3900319475328460030205
3900319475328460030205
No
انستیتو پاستور ایران
احسان
مصطفوی
3900319475328460030206
3900319475328460030206
No
انستیتو پاستور ایران
محمد
عزیزی
3900319475328460030207
3900319475328460030207
No
انستیتو پاستور ایران
علیرضا
خبیری
khabiri@pasteur.ac.ir
3900319475328460030208
3900319475328460030208
Yes
انستیتو پاستور ایران