Razi Journal of Medical Sciences

fa بررسی اثر مهاری سلول‌های بنیادی مزانشیمی بافت چربی بر روی تکثیر سلول‌های تک هسته‌ای طحالی موش دیابتی C57BL/6 در محیط آزمایشگاه Assessing in vitro inhibitory effect of adipose-derived mesenchymal stem cells on C57BL/6 diabetic mouse splenocytes proliferation ایمنی‌شناسی Immunology پژوهشي Research زمینه و هدف: دیابت نوع یک، نوعی بیماری خودایمنی محدود به عضو با واسطه لنفوسیت‌های T می‌باشد که در آن تخریب ایمونولوژیک سلول‌های بتای پانکراس موجب کاهش انسولین و در نتیجه افزایش قند خون می‌گردد. یکی از راه‌های درمان علاوه بر تزریق روزانه انسولین، پیوند آلوژنیک جزایر پانکراس است که در صورت عدم استفاده از داروهای سرکوب کننده ایمنی با تخریب مجدد و رد پیوند مواجه خواهد شد. از آن جایی که مصرف مداوم این داروها توسط بیماران اثرات جانبی متعددی را به همراه دارد، ما برای حل این مشکل خاصیت موضعی مهار ایمنی توسط سلول‌های بنیادی مزانشیمی را پیشنهاد می‌کنیم. هدف از انجام این طرح بررسی اثر ایمونومدولاتوری سلول‌های بنیادی مزانشیمی بافت چربی موش در مهار پاسخ سلول‌های تک‌هسته‌ای طحالی علیه جزایر پانکراس موش سینژنیک در محیط آزمایشگاه می‌باشد.<o:p /> روش کار: در این مطالعه سلول‌های مزانشیمی از بافت چربی موش سالم استخراج، کشت، تکثیر و تعیین هویت شده و خاصیت تمایزی آن‌ها به دو رده استئوسیت، آدیپوسیت اثبات گردید. پس از تهیه مدل دیابتی موشهایC57BL/6 با تزریق دوزهای پایین و متوالی استرپتوزوتوسین و تایید آن با قند خون بالای mg/dl 300، هیستوپاتولوژی پانکراس و کاهش معنی دار انسولین، جزایر پانکراس از موش سالم و سلول‌های تک هسته ای طحالی از موش سالم و دیابتی استخراج گردید. برای اثبات خاصیت ضد تکثیری سلولهای مزانشیمی، پس از همکشتی آنها با سلولهای طحالی در حضور لایزیت جزایر پانکراس، سنجش تکثیر سلولهای تک هسته ای طحالی با تکنیک MTT ارزیابی شد. داده ها در هر آزمایش حاصل سه بار تکرار مستقل و به صورت Mean gte msEquation 12]><m:oMath><m:r>±</m:r></m:oMath> !msEquation]--><v:shapetype id="_x0000_t75" coordsize="21600,21600" o:spt="75" o:preferrelative="t" path="m@4@5l@4@11@9@11@9@5xe" filled="f" stroked="f"> <v:stroke joinstyle="miter"> <v:formulas> <v:f eqn="if lineDrawn pixelLineWidth 0"> <v:f eqn="sum @0 1 0"> <v:f eqn="sum 0 0 @1"> <v:f eqn="prod @2 1 2"> <v:f eqn="prod @3 21600 pixelWidth"> <v:f eqn="prod @3 21600 pixelHeight"> <v:f eqn="sum @0 0 1"> <v:f eqn="prod @6 1 2"> <v:f eqn="prod @7 21600 pixelWidth"> <v:f eqn="sum @8 21600 0"> <v:f eqn="prod @7 21600 pixelHeight"> <v:f eqn="sum @10 21600 0"> </v:f></v:f></v:f></v:f></v:f></v:f></v:f></v:f></v:f></v:f></v:f></v:f></v:formulas> <v:path o:extrusionok="f" gradientshapeok="t" o:connecttype="rect"> <o:lock v:ext="edit" aspectratio="t"> </o:lock></v:path></v:stroke></v:shapetype><v:shape id="_x0000_i1025" type="#_x0000_t75" style="width: 6.6pt height: 12pt"> <v:imagedata src="file:///C:UsersKatyAppDataLocalTempmsohtmlclip11clip_image001.png" chromakey="white"> </v:imagedata></v:shape> SD گزارش شده است و با تست آماری One way Anova آنالیز گردیدند.<o:p /> یافته‌ها: نتایج حاصله نشان داد که سلولهای مزانشیمی قادرند در حضور تحریک کننده اختصاصی (لایزیت جزایر پانکراس) باعث کاهش معنی دار تکثیر سلولهای طحالی شوند (05/0p<).<o:p /> نتیجه‌گیری: بررسی اثرات تنظیم ایمنی و تمایزی سلولهای مزانشیمی به سلولهای ترشح کننده انسولین، می تواند در آینده افقی جدید را برای درمان دیابت تیپ یک ایجاد نماید.<o:p /> Background: Type 1 diabetes (T1D) is a T-cell mediated autoimmune disorder in which pancreas beta-cell destruction causes insulin deficiency and hyperglycemia. In addition to daily insulin treatment, allogeneic islet transplant inT1D is another therapeutic way that needs immunosuppressive drugs to control autoimmune damage and graft rejection. Since life-long application of these drugs is associated with serious side-effects, we proposed local immunomodulatory effect of mesenchymal stem cells (MSCs). The aim of this study was to investigate in vitro inhibitory influence of adipose-derived MSCs on C57BL/6 diabetic mouse splenocytes proliferation against syngeneic islet cells lysate. <o:p /> Methods: MSCs were extracted from abdominal fat tissue of healthy C57BL/6 mouse and cultured to prolipherate. Then, they were immunophynotyped and their differentiation to osteo- and adipocyte was approved. Diabetic C57BL/6 mouse model was prepared by administration of consecutive low-doses of sterptozotocin and diabetic state was confirmed by serum glucose (>300 mg/dL) and insulin levels, and pancreas histopathology. Pancreas islets were isolated from healthy mouse and splenocytes prepared from healthy and diabetic mice. To evaluate anti-proliferative effect of MSCs, they were co-cultured with splenocytes in the presence of islet lysate and proliferation was assayed by MTT technique. The presented data are mean SD and statistically analyzed with one way ANOVA.<o:p /> Results: Extraction and identification (Immunolphenotyping and differentiation) of MSCs had acceptable outcome.Diabetic state was confirmedin our model (blood glucose: 300±20 vs. 95±10 Insulin level: 4.9±0.5 vs 0.3±0.1 and lack of Langerhans islets in tissue sections). The co-culture experiments demonstrated that MSCs significantly decreased diabetic splenocytes proliferation in the presence of islet cells lysate (p<0.05).<o:p /> Conclusion: MSCs can effectively inhibit autoimmune response of diabetic splenocytes against islet cells lysate. Assessing MSCs immunomodulatory effects and differentiation property to insulin-producing cells may provide a new horizon for T1D treatment in the future.<o:p /> دیابت نوع یک, سلول‌های بنیادی مزانشیمی, پیوند, جزایر پانکراس Islets of pancreas, Mesenchymal stem cells, Type 1 diabetes, Transplantation 95 106 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-1674&slc_lang=fa&sid=1 حسین رهاوی 3900319475328460029678 3900319475328460029678 No سید محمود هاشمی 3900319475328460029679 3900319475328460029679 No مسعود سلیمانی 3900319475328460029680 3900319475328460029680 No جمال محمدی 3900319475328460029681 3900319475328460029681 No نادر تاجیک 3900319475328460029682 3900319475328460029682 Yes