fa تاثیر رتینوئیک اسید در تمایز سلّول‎های بنیادی مزانشیمال بافت چربی به سلّول‎های زایا علوم تشریحی Anatomy پژوهشي Research <p> <strong> زمینه و هدف </strong>: مطالعات انجام شده در سال‎های اخیر در زمینه تمایز سلّول ‎‎‎‎ های بنیادی به سلّول ‎‎‎‎ های زایا نگرش دانشمندان را به مبحث باروری و ناباروری تغییر داده است. تولید داخل آزمایشگاهی سلّول ‎‎‎‎ های زایا گام مهمی ‎‎ در درک بهتر نحوه تکامل سلّول ‎‎‎‎ های زایا می ‎‎ باشد. با توجه به اینکه که کاربرد بالینی سلّول­های بنیادی رویانی به دلیل توان تومور­زائی بالا و مسائل اخلاقی بسیار محدود است و محققان را با مشکلات عدیده­ای روبرو می­سازد، بنابراین یافتن سلّول­هایی با ویژگی­های پرتوانی و به دست آمده از یک بافت یا اندام بالغ می­تواند جایگزین مناسبی برای سلّول ‎ های مذکور در تولید گامت­های درون آزمایشگاهی باشد. در این تحقیق، جهت القای تمایز سلّول ‎‎‎‎ های بنیادی به سلّول ‎‎‎‎ های زایا از <a name="OLE_LINK18"></a><a name="OLE_LINK17">رتینوئیک اسید </a>( RA - Retinoic Acid ) استفاده شد. لذا در مطالعه حاضر سعی بر آن بود که با تمایز سلّول ‎‎‎‎ های بنیادی مزانشیمال بافت ‎ چربی به سلّول ‎‎‎‎ های زایا ( Germ cell )، سلّول بنیادی مناسبی را به عنوان جایگزین سلّول­های بنیادی رویانی معرفی کرد تا شاید بتوان با ادامه تحقیقات به تولید داخل آزمایشگاهی سلّول ‎‎‎‎ های جنسی تکامل یافته ‎ تر دست یافت. </p><p> <strong> روش کار </strong>: <a name="OLE_LINK32"></a><a name="OLE_LINK31">پس از به دست آوردن جمعیت خالصی از سلّول </a>‎‎‎‎ های بنیادی مزانشیمی برگرفته از بافت چربی (Adipose Tissue Derived Mesenchymal Stem Cells- ADMSC) ، جهت ارزیابی چند توان بودن این سلّول ‎‎‎‎ ها با استفاده از محیط تمایزی به Osteoblast و Adipocyte تمایز داده و با رنگ آمیزی Alizarin Red S و Oil red-O تمایز آن ها بررسی شد. همچنین فلوسیتومتری جهت بررسی مارکرهای سطحی سلّول ‎‎‎‎‎ های بنیادی مزانشیمال حاصل از بافت ‎ چربی و مغز استخوان (بیان دو مارکر CD90 ، CD44 و عدم بیان مارکرهای CD45 و CD31 ) انجام شد. سپس این سلّول ‎‎‎‎ ها در محیط ‎ های القایی حاوی رتینوئیک اسید (به مدت7 روز) به سلّول ‎‎‎‎ های زایا تمایز داده شدند. سپس آنالیز فلوسایتومتری و رنگ آمیزی ایمونوفلوروسنس جهت برسی بیان مارکرهای رده سلّول ‎‎‎‎ های زایا Mvh) و DAZL ( انجام شد. </p><p> <strong> یافته‌ها: </strong>در سلّول‎های مذکور، مثبت بودن مارکرهای سطحی سلّول ‎ های بنیادی CD90 و CD44 و منفی بودن مارکر آندوتلیال ( CD31 ) وسلّول ‎ های خونی ( CD45 ) نشان داده شده است که گویای مزانشیمی بودن این سلّول ‎ ها بود. قابلیت تمایز به سلّول ‎ های Osteoblast و Adipocyte با رنگ Alizarin Red S و Oil red-O نشان داده شد که بیان کننده چند توان بودن این سلّول ‎ ها می باشد . پس از بررسی سلّول ‎ ها با آنالیز فلوسایتومتری و ایمونوفلوروسنس مشخص شد که سلول‎های تیمار شده با رتینوئیک اسید، مارکرهای سلّول ‎‎‎‎ های زایا ( Mvh & DAZL ) را بیان داشته ‎ اند. </p><p> <strong> نتیجه </strong><strong>‌ </strong><strong>گیری </strong>: در مطالعه حاضر نشان داده شد که مارکرهای سلّول جنسی در سلّول بنیادی مزانشیمال حاصل از بافت چربی پس از اضافه کردن فاکتور تمایزی رتینوئیک اسید به محیط کشت بیان شده است. </p> <p> <strong> Background: </strong>Recent publications regarding the differentiation of stem cells to germ cells have motivated researchers to make new approaches in infertility. In vitro production of germ cells improves the understanding of differentiation process of male and female germ cells. Since using embryonic stem cells for this purpose has been associated with tumorogenesis and ethical criticisms, the mentioned cells were suggested to be replaced with some adult multipotent stem cells. In this study, we used Retinoic acid to induce the differentiation of stem cells into germ cells . To find appropriate non invasive source replacement for embryonic stem cells in this study we evaluated differential potentials of Adipocyte Derived Mesenchymal Stem Cells (ADMSCs) to germ like cells. </p><p> <strong> Methods </strong>: To find the differentiation capabilitypurified ADMSCs were obtained and differentiated to osteoblasts and adipocytes by using appropriate culture medium (Alizarin Red S and Oil red-O). Superficial markers for mesenchymal stem cells (expression of CD90 and CD44 and non-expression of CD45 and CD31) were investigated by flow cytometry to confirm mesenchymal lineage production. The cells were differentiated to germ cells in mediums containing Retinoic acid for 7 days. To evaluate germ cells characteristic markers (Mvh and Dazl) flow cytometry and imunoflorescence were used. </p><p> <strong> Results: </strong>Presence of stem cell superficial markers (CD90 and CD44) and absence of endothelial and blood cell markers (CD31 and CD45) were confirmative for the mesenchymal origin of these cells. The cells were able to differentiate into osteoblast and adipocyte cells. This fact was representative for the multipotential entity of the examined cells. After treating the cells with Retinoic acid, flow cytometry and imunoflorescence results showed remarkable expression of germ cells characteristic markers (Mvh and Dazl). </p><p> <strong> Conclusions: </strong>By this study, it was found that germ cell markers were expressed in ADMSCs after adding exogenous Retinoic acid into culture medium. </p> سلّول‎‎‎‎های بنیادی مزانشیمی، ناباروری، سلّول‎‎‎‎های زایا، اسید رتینوئیک. Mesenchymal stem cells, Infertility, Germ cells, Retinoic acid 10 20 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-1503&slc_lang=fa&sid=1 Maryam Hosseinzadeh Shirzeyli مریم حسین زاده شیرذیلی 3900319475328460025248 3900319475328460025248 No Tehran University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی تهران Parichehr Pasbakhsh پریچهر پاسبخش 3900319475328460025249 3900319475328460025249 No Tehran University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی تهران Fardin Amidi فردین عمیدی 3900319475328460025250 3900319475328460025250 No Tehran University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی تهران Zohre Afsartala زهره افسر طلا 3900319475328460025251 3900319475328460025251 No Islamic Azad University, Tehran, Iran دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Aligholi Sobhani علیقلی سبحانی 3900319475328460025252 3900319475328460025252 Yes Tehran University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی تهران