Razi Journal of Medical Sciences

fa ساخت وکتور ریپورتر القایی لوسیفراز برای ردیابی فعالیت ویروس HTLV-1 Construction of an inducible luciferase reporter vector for detection of HTLV-1 virus activity میکروبیولوژی Microbiology پژوهشي Research زمینه و هدف: ویروس HTLV-1 ((Human T_cell lymphotropic virus type با حدود 20 میلیون نفر آلوده در جهان یک مشکل بهداشت جهانی است که در مناطقی مثل ژاپن و خراسان ایران اندمیک است. این ویروس عامل بیماری پیشرونده لوسمی سلول های T بزرگسالان (ATL) می‌باشد که دارویی تائید شده موثر بر علیه آن تاکنون وجود ندارد. به دلیل خصوصیات غیر سیتولیتیکی و انتقال سلول به سلول این ویروس، مطالعات دارویی در کشت سلولی بر روی این ویروس با روش های معمول در آزمایشگاه In vitro )) کم بوده و منحصر به چند رده سلولی آلوده به آن می‌باشد .بنابراین ساخت وکتور ریپورتر برای ارزیابی عفونت ویروس HTLV1 در کشت سلولی به جهت مطالعات دارویی ضروری به نظر می رسد. ریپورتر های ساخته شده برای رتروویروس ها معمولاً بر اساس ترانس اکتیویشن ناحیه LTR می باشد. ناحیه LTR در ژنوم ویروس شامل پروموترویروس است که در تکثیرو نسخه برداری آن، تحت تاثیر پروتئین ویروسی Tax نقش دارد.<o:p /> روش کار: منطقه پروموتری LTR ویروس با استفاده از آنزیم محدود کننده از پلاسمید pUCLTR-Lacz بریده و در وکتور بدون پروموتر pGL4.17 که حامل ژن ریپورتر لوسیفراز است در بالادست ژن لوسیفرازساب کلون شد. ابتدا کلونینگ با colony PCR، هضم آنزیمی وتعیین توالی تایید شد. سپس سلول T293 باوکتور نوترکیب ترانسفکت شد وبیان القایی لوسیفراز مورد تایید قرار گرفت.<o:p /> یافته‌ها: وکتور نوترکیب تولید شده درسلول T293 پس از کوترانسفکت با وکتور بیانیTax باعث بیان قابل ملاحظه ی لوسیفراز تا 50 برابر درسلول‌های مورد آزمایش نسبت به کنترل شد.<o:p /> نتیجه‌گیری: با توجه به قابلیت بالای وکتور نوترکیب تولید شده، می تواند درمطالعات بعدی درساخت رده سلولی نشانگر برای ویروس HTLV-1، به جهت مطالعات پایه ای و دارویی به کار رود.<o:p /> Background: HTLV-1 (Human T_cell lymphotropic virus type), with about 20 million individuals infected worldwide, is a global health problem and is endemic in certain area such as Japan and Khorasan province of Iran.<o:p /> HTLV-1 is the causative agent of progressive diseases, Adult T cell Leukemia (ATL), and HTLV-I Associated Myelopathy/Tropical Spastic Paraparesis (HAM/TSP) which have no yet approved effective treatment. Due to non cytolytic characteristic of this virus and the cell associated properties, there is no routine producer for drug study in vitro and its confined to some HTLV infected cell lines. Therefore construction of a reporter vector is necessary to evaluate HTLV-1 infectivity in cell culture for drug studies. Designed reporters for retroviruses are usually based on LTR transactivatin. LTR region of HTLV-1 contains virus promoter that plays the most important role in replication and transcription by Tax transactivation effect.<o:p /> Methods: LTR region was digested from pUCLTR-Lacz by HindIII and subcloned into MSC region of a promoterless reporter vector, pGL4.17, upstream to luciferase gene. Colonies were screened by Colony PCR, then selected colonies were confirmed by RE digestion and sequencing. HEK 293T cell line was transfected by recombinant vector and inducibility expressing of luciferase was evaluated.<o:p /> Results: Recombinant vector has expressing levels more than 50 folds compared to control when co-transfected with Tax expressing vector into HEK293T cells.<o:p /> Conclusions: According to high functionality of produced recombinant vector, it seems a good applicable tool to make an indicator cell line in subsequent basic and drug studies.<o:p /> لوسیفراز، وکتور ریپورتر، HTLV-1. Reporter vector, HTLV-1, Luciferase. 60 67 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-1469&slc_lang=fa&sid=1 Mojtaba Fatahi Abdizadeh مجتبی فتاحی عبدی زاده 3900319475328460024316 3900319475328460024316 No Ahvaz Jondishapor University of Medical Sciences دانشگاه جندی شاپور علوم پزشکی اهواز Manoochehr Makvandy منوچهر مکوندی 3900319475328460024317 3900319475328460024317 Yes Ahvaz Jondishapor University of Medical Sciences دانشگاه جندی شاپور علوم پزشکی اهواز Alireza Samarbafzadeh علیرضا سمر باف زاده 3900319475328460024318 3900319475328460024318 No Ahvaz Jondishapor University of Medical Sciences دانشگاه جندی شاپور علوم پزشکی اهواز Maryam Latifnia مریم لطیف نیا 3900319475328460024319 3900319475328460024319 No Rasuol akram hospital بیمارستان حضرت رسول اکرم Keyhan Azadmanesh کیهان آزادمنش 3900319475328460024320 3900319475328460024320 No Pasteur Institute of Iran انستیتو پاستور ایران