Razi Journal of Medical Sciences

fa مقایسه دو روش کشت و PCR در جداسازی مایکوپلاسما هومینیس و اوره‌آ پلاسما اوره‌آلیتیکوم از مایع منی مردان نابارور مراجعه‌کننده به پژوهشکده رویان در سال 1388 Comparison of Culture with PCR for Detection of Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum in Semen Samples of Infertile Men Referring to the Royan Institute in 2009 میکروبیولوژی Microbiology پژوهشي Research <h2 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"> زمینه و هدف: عفونت‌های ناشی از مایکوپلاسماهای تناسلی می‌تواند تأثیرات منفی بر سلامت تناسلی مردان داشته و به ناباروری منتهی گردد. هدف از این تحقیق، بررسی وجود مایکوپلاسما هومینیس و اوره‌آپلاسما اوره‌آلیتیکوم در نمونه‌های مایع منی مردان نابارور مراجعه‌کننده به پژوهشکده رویان توسط دو روش کشت و PCR و مقایسه این دو روش با یکدیگر بود.<h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl">روش کار: در این مطالعه توصیفی-تحلیلی مقطعی، نمونه‌های مایع منی از 220 مرد نابارور اخذ و به سه بخش تقسیم گردید: بخش اول جهت انجام تست اسپرموگرام استفاده شد، بخش دوم�به محیط کشتPPLO broth تلقیح و سریعاً از فیلترهای 45/0 میکرومتر((µm عبور و طبق دستورالعمل، در محیط‌های اختصاصی مایع و جامد PPLO کشت و در دمای C˚37 و در مجاورت CO2 نگهداری شد�و بخش سوم نمونه به منظور انجام PCR استفاده شد که برای شناسائی اوره‌آپلاسما اوره‌آلییتکوم از پرایمرهای U4 و U5 به منظور تکثیر ژن Urease این باکتری و برای مایکوپلاسما هومینیس از پرایمرهای RNAH1 و RNAH2 برای تکثیر ژن 16S rRNAاستفاده گردید؛ سپس یافته‌ها توسط نرم‌افزار SPSS V.16 تحلیل شد.�از آزمون‌های آماری ANOVA، Post Hoc، Crosstab، Chi Square و Mc Nemar استفاده شد.</h4><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl">یافته‌ها: از مجموع 220 نمونه مایع منی بررسی شده با استفاده از روش کشت، 2/3% و با روش PCR 1/4% از نمونه‌ها فقط از نظر مایکوپلاسما هومینیس مثبت بود. با روش کشت، 7/27% و با PCR 1/29% فقط از نظر اوره‌آپلاسما اوره‌آلیتیکوم مثبت بود؛ با روش کشت، 5% نمونه‌ها و با PCR، 4/11% از نظر هر دو باکتری مثبت بودند. در بررسی متغیرها در دو روش کشت و PCR، در دو گروه "فقط اوره‌آپلاسما اوره‌آلیتیکوم مثبت" و "هر دو باکتری مثبت"، میانگین pH نسبت به گروه "هردو باکتری منفی"، پایین‌تر و اسیدی‌تر بود)(Culture)006/0(p= و)(PCR)000/0(p= و نیز قدرت تحرک اسپرم‌ها در گروه "هردو باکتری مثبت" نسبت به گروه "فقط اوره‌آپلاسما اوره‌آلیتیکوم مثبت"، پایین‌تر بود)(Culture)032/0(p= و)(PCR)009/0(p=.</h4><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl">نتیجه‌گیری: با توجه به یافته‌های این تحقیق، درصد نسبتاً بالایی از مردان نابارور به این باکتری‌ها آلوده بوده‌اند و با توجه به عواقب خطرناک این عفونت‌ها، تشخیص به موقع این باکتری‌ها در مردان نابارور فاقد علائم بالینی، ضروری به نظر می‌رسد. PCR در مقایسه با کشت یک روش حساس‌تر، سریع‌تر و دارای ویژگی بالاتری می‌باشد.</h4></h2> Background: Infection due to genital Mycoplasmas such as Mycoplasma hominis (M.hominis) and Ureaplasma urealyticum (U.urealyticum) may have harmful effects on the reproductive health of men and may lead to male infertility. This study was performed to compare culture with PCR method for detection of these bacteria in infertile men who referred to the Royan Institute.Methods: In this descriptive-analytic, cross-sectional study semen samples were collected from 220 infertile men and divided to 3 sections: first section was used for semen analysis, second section was inoculated into PPLO broth transport media and passed through 0.45µm pore-size filters, then filtrates were inoculated into specific PPLO broth and agar media and incubated at 37˚C under elevated CO2 atmosphere and the third section was used for PCR in which U4 and U5 primers were used for amplification of Urease gene of U. urealyticum and RNAH1 and RNAH2 for amplification of 16S rRNA gene of M. hominis. The results were analyzed with SPSS V.16 software. For data analysis ANOVA, Post Hoc, Crosstabs, Chi square and Mc Nemar tests were used.Results: From a total of 220 semen samples tested, 3.2% were positive with culture and 4.1% with PCR method for only M. hominis meanwhile 27.7% were positive with culture and 29.1% with PCR for only U. urealyticum. Also 5% of the samples in culture and 11.4% in PCR method were positive for both of the bacteria evaluation of semen parameters showed that in both culture and PCR methods, pH was lower in the two groups of “only U. urealyticum positive” and “positive for both bacteria” as compared to the group “negative for both bacteria” (p=0.006 and p=0.000 respectively for culture and PCR) and the mean of sperm motility was lower in group “positive for both bacteria” than the group “only U. urealyticum positive” in two methods: p=0.032(culture), p=0.009(PCR). Conclusion: Results of this study showed that higher percentage of infertile men are infected with these bacteria which may lead to infertility thus, isolation of these bacteria in infertile men with no clinical symptoms is necessary. PCR as compared to culture is a more sensitive, quick, specific and fast method. کلیدواژه‌ها: 1-مایکوپلاسما هومینیس 2-اوره‌آپلاسما اوره‌آلیتیکوم 3-مردان نابارور 4-کشت مایع منی Keywords: 1) Mycoplasma hominis 2) Ureaplasma urealyticum 3) Infertile men 4) Semen culture 5) Semen PCR 15 29 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-999&slc_lang=fa&sid=1 M.H Ahmadi محمدحسین احمدی 3900319475328460015909 3900319475328460015909 Yes N Amirmozafari نور امیرمظفری 3900319475328460015910 3900319475328460015910 No M.A Sedighi-Gilani محمدعلی صدیقی گیلانی 3900319475328460015911 3900319475328460015911 No B Kazemi بهرام کاظمی 3900319475328460015912 3900319475328460015912 No F Masjedian-Jazi فرامرز مسجدیان جزی 3900319475328460015913 3900319475328460015913 No