fa استفاده از روش‌های مولکولی RFLP-PCR و توالی‌یابی مستقیم جهت تعیین ژنوتیپ‌های هپاتیت B در زندانیان معتاد به مواد مخدر تزریقی استان تهران بیولوژی (زیست شناسی) Biology پژوهشي Research <h2 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt DIRECTION: rtl" dir="rtl"><p><span></span></p><p><span>    زمینه و هدف: </span><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA">عفونت حاصل ازهپاتیت </span><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr"><font face="Times New Roman">B</font></span><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA">یک مشکل جدی بهداشت جهانی است. طبق ارزیابی هایی که تاکنون انجام شده، هر ساله حدود 500000 تا 2/1 میلیون مرگ ناشی از هپاتیت مزمن، سیروز و هپاتوسلولار در سراسر جهان گزارش می‌شود. از انجائی که داده‌های اپیدمیولوژیکی حاصل از تعیین ژنوتیپ‌ها و ساب ژنوتیپ‌های ویروس هپاتیت </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">B</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span>، کمک شایانی در برنامه‌های واکسیناسیون، درمانهای ضد ویروسی، تشخیص و پیشگیری از بیماری را فراهم می‌سازد، لذا بر آن شدیم تا ژنوتیپ‌های این ویروس را در زندانیان معتاد به مواد مخدر تزریقی مورد بررسی قرار دهیم.</span><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><span>روش کار: در تحقیقی که به صورت مقطعی در سال 2008، برروی 122 نمونه سرمی ازافراد معتاد به مواد مخدر تزریقی حامل </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">HBsAg</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span> جهت تعیین نوع ژنوتیپ ویروس </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">HBV</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span> درسطح استان تهران انجام گردید، با استفاده از روش‌های مولکولی مقرون به صرفه </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">PCR</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span> و </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">RFLP</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span>، ژنوتیپ آنها تعیین شد. سپس آزمایشات تأییدی توالی یابی مستقیم انجام و درخت فیلوژنتیکی بااستفاده از نرم افزارهای بیوانفورماتیک (</span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">Bioedit,Mega,ClustalW</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span>) ترسیم گردید و به وسیله آزمون آماری </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">SPSS16</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span>، </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">P<0.05</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span> مورد بررسی قرار گرفت. <p></p></span></h4><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><span>یافته‌ها : 115نمونه سرمی پس از انجام</span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">Nested PCR</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: "><span dir="rtl"></span> <span lang="FA"><font face="B Yagut">مثبت گزارش شدند. ژنوتیپ کلیه نمونه‌ها پس از </font></span></span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">RFLP</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: "><span dir="rtl"></span> <span lang="FA"><font face="B Yagut">با استفاده از آنزیم‌های برشی</font></span></span><span><span dir="ltr"></span><font face="Times New Roman"> </font></span><span dir="ltr"><font face="Times New Roman">(BsrI , StyI, EaeI ,DpnI , HpaI)I</font></span><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA">و همچنین توالی یابی مستقیم به همراه رسم درخت فیلوژنتیکی با روش </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">Neighbor-Joining</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span>، در 100% نمونه‌ها، ژنوتیپ </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">D</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: "><span dir="rtl"></span> <span lang="FA"><font face="B Yagut">(ساب ژنوتیپ </font></span></span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">D1</span><span dir="rtl"></span></font><span><span dir="rtl"></span> وساب تایپ<font face="Times New Roman">ayw2</font></span><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr"><font face="Times New Roman"> (</font></span><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA">را نشان دادند.<p></p></span></h4><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><span>نتیجه گیری: </span><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA">در این پژوهش از 115 نمونه سرمی مورد مطالعه، مشخص گردید که ژنوتیپ غالب در زندانیان مبتلا، ژنوتیپ </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">D</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span> می‌باشد. به عبارتی گونه‌های ژنوتیپی </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">HBV</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span> ایرانیان در ارتباط </span><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA">نزدیک با یکدیگر و همگون می‌باشند.</span><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"> حضور این ژنوتیپ با پایین بودن میزان بیماری‌های شدید کبدی ناشی ازعفونت مزمن هپاتیت </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">B</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span> (سیروز، هپاتوسلولار کارسینوما) در ایران مطابقت دارد. <p></p></span></h4></p></h2><p></p> <p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="MatnLatin"><strong><span><font face="Verdana"></font></span></strong></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="MatnLatin"><strong><span><font face="Verdana">    Background <span style="mso-spacerun: yes"> </span><span dir="rtl"></span></font>&</span><span><span dir="ltr"></span> A</span></strong><span><font face="Verdana"><strong>im:</strong> Hepatitis B virus (HBV) infection is a global health problem. Current researches indicate that 500,000 to 1.2 million deaths per year are caused by chronic hepatitis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma (HCC). HBV genotyping and subtyping provide epidemiological data that may contribute to vaccination and antiviral treatment strategies, diagnostic development, and determination of the course of the disease. Hereby we decided to evaluate the genotype of this virus in prisoners who <span style="mso-spacerun: yes"> </span>are addicted to some kinds of injection drugs. </font></span></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="MatnLatin"><font face="Verdana"><b><span lang="EN">Patients and Method:</span></b><span lang="EN"> In this cross- sectional study which was done in <p lace w:st="on" ><city w:st="on" >Tehran</city /></place /> province in 2008, HBV genotypes of serum samples from 122 HBsAg positive intravenous drug user prisoners were determined using cost-effective and standard methods such as PCR and RFLP. Then direct sequencing was utilized to confirm and revaluate the results of PCR-RFLP. The phylogenetic tree was drawn by computer biosoftware (Bioedit,Mega,ClustalW) and the</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: Arial mso-ascii-font-family: Verdana mso-hansi-font-family: Verdana" dir="rtl" lang="EN"><span dir="rtl"></span> </span><span lang="EN"><font face="Verdana">results were assessed by statistical analysis SPSS v.16 (P<0.05)as well. </font></span></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="MatnLatin"><font face="Verdana"><b><span lang="EN">Results:</span></b><span lang="EN"> 115 samples were reported positive when analyzed by nested PCR. All of these positive samples were reported to be genotype D by RFLP using BsrI , StyI, EaeI ,DpnI , and HpaI enzymes. In addition,phylogenetic tree drawn by Neighbor-Joining method in 100% of the subjects confirmed the existence of genotype D(subgenotype D1, subtype ayw2). </span></font></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="MatnLatin"><font face="Verdana"><b><span lang="EN">Conclusion:</span></b><span lang="EN"> 115 HBV isolates from prisoners represent homogenous genotypic diversity , and our results concur with other reports from Iran, all showing that genotype D is the only detectable genotype in this study.This genotype with a low rate of severe liver diseases caused by HBV (cirrhosis, hepatocellular carcinoma) is in accordance with our results. </span></font></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="MatnLatin"><span lang="EN"></span><p></p></p><p><font face="Verdana"> </font></p> کلیدواژه ها: 1- ژنوتیپ هپاتیت B 2- افراد معتاد حامل HBsAg 3- PCR 4- RFLP 56 65 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-961&slc_lang=fa&sid=1 F Salem فاطمه سالم 3900319475328460016509 3900319475328460016509 Yes Payame Noor University دانشگاه پیام نور M.R Aghasadeghi محمد رضا آقا صادقی 3900319475328460016510 3900319475328460016510 No F Javadi فوزیه جوادی 3900319475328460016511 3900319475328460016511 No F Roohvand فرزین روحوند 3900319475328460016512 3900319475328460016512 No Pasteur Institute گروه هپاتیت وایدز، انستیتو پاستور M Joolaee مهسا جولایی 3900319475328460016513 3900319475328460016513 No G Bahramali گلناز بهرامعلی 3900319475328460016514 3900319475328460016514 No E Mostafavi احسان مصطفوی 3900319475328460016515 3900319475328460016515 No H Gholami حسین غلامی 3900319475328460016516 3900319475328460016516 No S Hekmat سهیلا حکمت 3900319475328460016517 3900319475328460016517 No