fa تعیین جایگاه سلولی پروتئین انکسین C3.1 (ANXC3.1) و تأثیر بیان بیش از حد آن بر روی رشد وترشح پروتئین در آسپرژیلوس نیجر بیولوژی (زیست شناسی) Biology پژوهشي Research <b style="mso-ansi-font-weight: normal"><span lang="FA"><p></p></span></b><p></p><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><span></span></h4><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><span>    زمینه و هدف: انکسین‌ها، خانواده بزرگی از پروتئین‌های متصل شونده به کلسیم و فسفولیپیدها می‌باشند که تقریباً درتمامی رده‌های یوکاریوتی وجود دارند. پروتئین‌های مذکور در طیفی از قارچ‌ها ازجمله آسکومیست‌ها، بازیدیومیست‌ها و همچنین اوومیست‌ها یافت شده‌اند. این مطالعه<font face="B Yagut"><span style="mso-spacerun: yes">  </span>با هدف بررسی جایگاه سلولی انکسین</font></span><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">C3.1</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span> در قارچ رشته‌ای آسپرژیلوس نیجر به انجام رسیده است. همچنین، تأثیر بیان بیش از حد این پروتئین بر روی رشد و توانائی ترشحی قارچ بررسی گردید.</span><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><span>روش بررسی: دراین مطالعه تجربی، ژن انکسین </span><font face="Times New Roman"><span style="LETTER-SPACING: -0.15pt" dir="ltr">C3.1</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span> با استفاده از روش </span><font face="Times New Roman"><span style="LETTER-SPACING: -0.15pt" dir="ltr">PCR</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span> (</span><font face="Times New Roman"><span style="LETTER-SPACING: -0.15pt" dir="ltr">Polymerase Chain Reaction</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span>) از روی </span><font face="Times New Roman"><span style="LETTER-SPACING: -0.15pt" dir="ltr">DNA</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span> ژنومی قارچ آسپرژیلوس نیجر تکثیر و پس از تأئید صحت توالی، در ساخت دو سازه ژنی قابل القاء به‌کار گرفته شد. در سازه اول، انکسین به‌صورت ممزوج با </span><font face="Times New Roman"><span style="LETTER-SPACING: -0.15pt" dir="ltr">GFP(Green Fluorescent Protein)</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span> و تحت کنترل پروموتور گلوکوآمیلاز در ناقل بیانی </span><font face="Times New Roman"><span style="LETTER-SPACING: -0.15pt" dir="ltr">PGEM–Egfp</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span> و در سازه دوم، ژن مذکور تحت کنترل پروموتور سلوبیوهیدرولاز در ناقل بیانی </span><font face="Times New Roman"><span style="LETTER-SPACING: -0.15pt" dir="ltr">pMJB104</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span> کلون گردید. این سازه‌ها با استفاده از روش استاندارد ترانسفورماسیون قارچ‌ها به سویه آسپرژیلوس نیجر </span><font face="Times New Roman"><span style="LETTER-SPACING: -0.15pt" dir="ltr">N402</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span> وارد شدند. بیان هر یک از سازه‌ها با استفاده از منبع کربنی القاءکننده، القاء و تأثیر بیان بیش از حد ژن انکسین بر روی رشد شعاعی سویه‌های ترانسفورمنت و میزان ترشح پروتئین توسط آن‌ها بررسی گردید. مقایسه میانگین سرعت رشد شعاعی و میانگین میزان ترشح پروتئین سویه‌های ترانسفورمنت با میانگین‌های مربوطه در سویه وحشی با استفاده از آزمون </span><font face="Times New Roman"><span style="LETTER-SPACING: -0.15pt" dir="ltr">t</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span> انجام پذیرفت. جایگاه سلولی انکسین در سویه ترانسفورمنتی که پروتئین ممزوج با </span><font face="Times New Roman"><span style="LETTER-SPACING: -0.15pt" dir="ltr">GFP</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span> را بیان می‌نمود، با استفاده از میکروسکوپ فلئورسنت تعیین گردید.<p></p></span></h4><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><span>یافته‌ها: اثر بیان بیش از حد ژن انکسین </span><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">C3.1</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span><font face="B Yagut"><span style="mso-spacerun: yes">  </span>بر روی سرعت رشد و ترشح پروتئین در آسپرژیلوس نیجر بررسی گردید. مقایسه میانگین سرعت رشد شعاعی و میـزان ترشح پروتئین سویه‌های ترانسـفورمنت با سویه وحشی، تفـاوت معنی‌داری را نشان نداد (05/0 </font></span><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">α<</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span>). مطالعه‌ی میکروسکوپی سویه‌ی بیان‌کننده پروتئین ممزوج</span><span dir="ltr"></span><span dir="ltr" lang="AR-SA"><span dir="ltr"></span><font face="Times New Roman">�</font></span><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA">انکسین-</span><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">GFP</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: "><span dir="rtl"></span> </span><span dir="ltr"></span><span dir="ltr"><span dir="ltr"></span><span style="mso-spacerun: yes"><font face="Times New Roman"> </font></span></span><span dir="rtl"></span><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span><font face="B Yagut"><span style="mso-spacerun: yes"> </span>نشان داد که<span style="mso-spacerun: yes">  </span>انکسین یک پروتئین سیتوزولی است که در سراسر هیف قارچی منتشر می‌باشد. <p></p></font></span></h4><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><span>نتیجه‌گیری: این نوع مطالعه در تعیین جایگاه سلولی انکسین </span><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">C3.1</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-SA"><span dir="rtl"></span> برای اولین بار انجام گرفته و گزارش می‌شود. انکسین، یک توزیع سیتوزولی داشته و بیان بیش از حد آن منجر به افزایش ترشح پروتئین درقارچ رشته‌ای آسپرژیلوس نیجر نمی‌گردد.<p></p></span></h4></h4> <p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><strong></strong></font></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><font style="BACKGROUND-COLOR: #f7f8fc" face="Tahoma">    </font><strong>Background and Aim:</strong> Annexins are a large family of calcium-phospholipid binding proteins which are distributed among nearly all eukaryotes. These proteins have been found in a wide range of fungi including ascomycetes, basidiomycetes and oomycetes. The aim of present study has been the investigation of cellular localization of ANXC3.1 in filamentous fungus Aspergillus <country-region w:st="on" >niger</country-region /> (A. <p lace w:st="on" ><country-region w:st="on" >niger</country-region /></place />). The effect of ANXC3.1 overexpression on growth rate and protein secretion of A. <p lace w:st="on" ><country-region w:st="on" >niger</country-region /></place /> has also been investigated. </font></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><b>Materials and Methods:</b> In this experimental study, the annexin C3.1 gene was PCR-amplified using genomic DNA of Aspergillus <p lace w:st="on" ><country-region w:st="on" >niger</country-region /></place /> as a template. Following the confirmation of gene sequence, it was used in the preparation of two inducible gene constructs. In the first construct, annexinC3.1 was cloned in PGEM–Egfp expression vector as a GFP fusion and under the control of glucoamylase promoter. In the second construct, the gene was cloned in pMJB104 expression vector, driven by cbhB (cellobiohydrolase B) promoter. These constructs, then were transformed into A. <p lace w:st="on" ><country-region w:st="on" >niger</country-region /></place /> N402 using a standard method. Overexpression of each construct was induced by an inducer carbon source and the effect of annexinC3.1 overexpression on radial growth rate and protein secretion was analysed in transformants. Comparisons of radial growth rates, as well as protein secretion level, between wild type and transformants was performed using t test. Cellular localization of annexinC3.1 was investigated in annexin-GFP expressing transformant by fluorescent microscopy. </font></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><b>Results:</b> The effect of annexinC3.1 overexpression on growth rate and protein secretion was investigated in Aspergillus <p lace w:st="on" ><country-region w:st="on" >niger</country-region /></place />. No significance difference was observed in growth rate or level of protein secretion when transformants and wild type were compared (</font><span style="FONT-FAMILY: ">α</span><font face="Verdana"> <0.05). Microscopic examination of annexin C3.1-GFP fusion protein demonstrated that annexinC3.1 is a cytosolic protein which is distributed along the fungal mycelium. </font></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><b>Conclusion: </b>This is the first report on annexinC3.1 cellular localization. Annexin C3.1 is a cytosolic protein and its overexpression in A. <p lace w:st="on" ><country-region w:st="on" >niger</country-region /></place /> does not increase the protein secretion level.</font></p> آسپرژیلوس نیجر،انکسینC3.1،سلوبیوهیدرولاز ،گلوکوآمیلاز ، پروتئین سیتوزولی Aspergillus niger, Annexin C3.1 , Cellobiohydrolase B (cbhB),Glucoamylase, Cytosolic protein 121 129 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-862&slc_lang=fa&sid=1 H. Rahimi حمزه رحیمی 3900319475328460017813 3900319475328460017813 Yes M.M. Farajollahi محمدمراد فرج‌اللهی 3900319475328460017814 3900319475328460017814 No S.A. Yazdanparast سیدامیر یزدان‌پرست 3900319475328460017815 3900319475328460017815 No M. Azizi محمد عزیزی 3900319475328460017816 3900319475328460017816 No V. Khalaj وحید خلج 3900319475328460017817 3900319475328460017817 No