fa تعیین سطح پلاسمایی تیامین در بیماران همودیالیزی: یک روش دقیق کروماتوگرافی با کارکرد عالی فارماکولوژی Pharmacology پژوهشي Research <h2 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt DIRECTION: rtl" dir="rtl"><p><span><font size="1"></font></span></p><p><span><font size="1">    زمینه و هدف: درمان‌های جایگزین کلیه، اغلب با تغییرات عناصر کمیاب و متابولیسم ویتامین‌ها همراه است. تجویز مولتی‌ویتامین‌ها به بیماران دیالیزی به صورت روتین در مراکز دیالیز صورت می‌گیرد. غلظت پلاسمایی تیامین، نشانگر خوبی برای وضعیت تغذیه‌ای بیمار است. در این مطالعه یک روش دقیق کروماتوگرافی با کارکرد عالی برای تعیین غلظت پلاسمایی تیامین در انسان راه‌اندازی شده و غلظت پلاسمایی تیامین در گروهی از بیماران همودیالیزی بررسی شده است. هدف از انجام این پژوهش، اندازه‌گیری میزان تیامین در خون بیماران همودیالیزی مزمن به منظور ارزیابی نیاز یا عدم نیاز این بیماران به مکمل‌های حاوی تیامین است.</font></span><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><font size="1"><span>روش بررسی: در این مطالعه تجربی، پلاسمای 9 نفر بیمار همودیالیزی ایرانی برای تعیین میزان تیامین آن آنالیز شده و با یک گروه داوطلب سالم ایرانی مقایسه شد. طریقه عمل بر اساس اکسیداسیون تیامین قبل از ورود به ستون و تبدیل آن به تیوکروم و سپس ردیابی توسط ردیاب فلورسنت بود. 1 میلی‌لیتر از پلاسما توسط تری کلرواستیک اسید دی پروتئینه شده و تیامین توسط دی‌اتیل اتر استخراج شد. سپس سیانوژن بروماید (3/0 میلی‌لیتر) اضافه شد تا تیامین را به تیوکروم تبدیل کند. نمونه‌ها (25 میکرولیتر) به یک ستون (</span><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">mm</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span> 250 × 6/4) </span><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">µm</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span> 4 </span><span dir="ltr"></span><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr"><span dir="ltr"></span><font face="Times New Roman">,</font></span><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA">‌₈</span><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">Novapak C</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span> تزریق شد. فاز متحرک شامل متانول: بافر فسفات (30 میلی‌مولار) با نسبت 55:45 و 05/0 % سدیم لوریل سولفات بود. نتایج به دست آمده با استفاده از </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">Student t-test</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span> و </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr">ANOVA</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"><span dir="rtl"></span> یک طرفه آنالیز شد. آنالیز اطلاعات با استفاده از برنامه </span><span style="mso-bidi-language: FA" dir="ltr"><font face="Times New Roman">SPSS VB<p></p></font></span></font></h4><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><font size="1"><span>یافته‌ها: نتایج نشان می‌دهد که روش استفاده شده برای تعیین مقدار تیامین در پلاسما، روشی بسیار دقیق و تکرارپذیر است. حداقل مقدار قابل اندازه‌گیری تیامین 2/0 نانو گرم در میلی‌لیتر و درصد بازیافت حدود 85% بوده است. ضرائب تغییرات بین روزی و درون روزی برای 3 غلظت اختیاری تیامین در پلاسما در محدوده 94/2-2/0‌% بود. میانگین غلظت پلاسمایی تیامین در 10 نفر داوطلب سالم 95/0</span><span style="mso-bidi-language: FA mso-bidi-font-family: 'Times New Roman'" lang="FA"><font face="Times New Roman">±</font></span><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA"> 07/3 نانوگرم در میلی‌لیتر و در بیماران 12/1</span><span style="mso-bidi-language: FA mso-bidi-font-family: 'Times New Roman'" lang="FA"><font face="Times New Roman">±</font></span><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA">72/4 نانوگرم در میلی‌لیتر قبل از همودیالیز و 67/0</span><span style="mso-bidi-language: FA mso-bidi-font-family: 'Times New Roman'" lang="FA"><font face="Times New Roman">±</font></span><span style="FONT-FAMILY: " lang="FA">29/4 نانوگرم در میلی‌لیتر بعد از همودیالیز بود. مطالعه حاضر نشان می‌دهد که میانگین غلظت پلاسمایی تیامین در بیماران همودیالیزی ایرانی تفاوت معنی‌داری با داوطلبین سالم ایرانی ندارد و همچنین قبل و بعد از دیالیز نیز تغییر چندانی نمی کند.<p></p></span></font></h4><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><span><font size="1">نتیجه‌گیری: روش استفاده شده برای اندازه‌گیری تیامین در پلاسما روشی حساس، دقیق و تکرارپذیر است و برای مطالعات کینتیکی تیامین مناسب است. بر اساس یافته‌های این تحقیق می‌توان چنین نتیجه گرفت که بیمارانی که به صورت مزمن تحت همودیالیز قرار می‌گیرند، تفاوت معنی‌داری در مورد غلظت تیامین با افراد سالم ندارند و میزان ویتامین موجود در رژیم غذایی این افراد برای رفع نیاز بدن کافی به نظر می‌رسد و دریافت ویتامین اضافی توسط این بیماران ضروری نیست.<p></p></font></span></h4></p></h2><p></p> <p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><strong></strong></font></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><font style="BACKGROUND-COLOR: #f7f8fc" face="Tahoma">    </font><strong>Background and Aim:</strong> Renal replacement therapies are usually associated with changes in trace elements and metabolism of vitamins. Multivitamins are administered routinely to dialysis patients in dialysis centers. Thiamin plasma level is a good indicator of nutritional state of the patient. In this study, a sensitive high-performance liquid chromatography HPLC method for determination of the concentration of thiamin in human plasma has developed by which thiamin level is detected in plasma of hemodialysis patients. The aim of the study was determination of thiamin blood levels in chronic hemodylysis patients in order to evaluate their need for thiamin supplements.</font></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><b><span style="LETTER-SPACING: -0.1pt">Materials and Methods:</span></b><span style="LETTER-SPACING: -0.1pt"> In this experimental study, the plasma of nine Iranian patients on hemodialysis were analyzed for their thiamin levels and compared to the thiamin levels in a group of healthy Iranian subjects. The procedure was based on pre-column oxidation of thiamin to thiochrome followed by fluorescence detection. Plasma (1ml) was deproteinized with trichloroacetic acid and thiamin was extracted with diethyl ether. Then, cyanogens bromide (0.3 M) was added to convert thiamin to thiochrome. Samples (25µl) were applied to a Novapak C₈, 4µm (4.6 × 250 mm) column. The mobile phase consisted of methanol: phosphate buffer (30mM) in the ratio of 45:55 and 0.05% sodium lauryl sulfate. Data were analyzed using SPSS V13. Statistical analysis was done by t-test and One- way Anova test.</span></font><p></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><b>Results:</b> A precise and reproducible HPLC method was developed for determination of thiamin in plasma. The minimum detection limit was 0.2 ng/ml and percentage recovery was 85%. Inter and Intra day assay variabilities were determined for 1,5 and 15 ng/ml thiamin spikes in plasma and coefficient of variations were in the range 0.2-2.94%. The average plasma thiamin level in 10 healthy Iranian subjects was 3.07±0.95 ng/ml and in Iranian patients was 4.72±1.12 ng/ml and 4.29±0.67 ng/ml before and after hemodialysis, respectively. Our study has shown that the mean plasma thiamin level in Iranian patients on hemodialysis has no significant difference with its level in healthy Iranian subjects. The thiamin level also remained unchanged before and after the hemodialysis.</font></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><b>Conclusion:</b> The HPLC method used for determination of thiamin in plasma was sensitive, accurate, reproducible and suitable for kinetic studies of thiamin. According to our findings the thiamin level in patients undergoing hemodialysis has no significant difference with healthy subjects and it seems that dietary vitamin is sufficient for the normal functions of the body, and taking viamin supplementation is not necessary for these patients.<span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " dir="rtl"><span dir="rtl"></span> </span></p></p><p></p> تیامین ، کروماتوگرافی با کارکرد عالی ، غلظت پلاسمایی، همودیالیز Thiamin,High Performance Liquid Chromatography (HPLC),Plasma Level,Hemodialysis 177 185 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-312-23&slc_lang=fa&sid=1 M. Motevalian منیژه متولیان 3900319475328460017735 3900319475328460017735 Yes E. Souri عفت سوری 3900319475328460017736 3900319475328460017736 No N. Tafreshi نیوشا تفرشی 3900319475328460017737 3900319475328460017737 No H. Jalalizadeh حسن جلالی‌زاده 3900319475328460017738 3900319475328460017738 No M. Mahmoudian مسعود محمودیان 3900319475328460017739 3900319475328460017739 No