fa کلونینگ ژن p4 لیشمانیا ماژور انگل‌شناسی parasitology پژوهشي Research <h2 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt DIRECTION: rtl" dir="rtl"><p><span></span></p><p><span>    زمینه و هدف: ژن </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: AR-DZ" dir="ltr">p4</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> لیشمانیا ماژور، در مرحله آماستیگوت انگل بیان می‌شود که احتمالاً ترکیب مناسب جهت تهیه واکسن بر علیه لیشمانیوز است. هدف از انجام این پژوهش، کلون این ژن در یک وکتور (ناقل) مناسب برای مطالعات بیشتر در زمینه واکنس‌سازی بود.</span><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><span>روش بررسی: این بررسی به صورت تجربی انجام گرفته است. در مرحله پروماستیگوت، لیشمانیا ماژور در محیط </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: AR-DZ" dir="ltr">N.N.N</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> و سپس در محیط </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: AR-DZ" dir="ltr">RPMI1640</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> به صورت انبوه کشت داده شد. در ادامه </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: AR-DZ" dir="ltr">DNA</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> ژنومی انگل با روش جوشان استخراج شد. سپس </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: AR-DZ" dir="ltr">PCR</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> با پرایمرهای اختصاصی ژن </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: AR-DZ" dir="ltr">p4</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> انجام شد. محصول </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: AR-DZ" dir="ltr">PCR</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> از روی ژل آگاروز خالص سازی شد و در پلاسمید نو ترکیب غربالگری شد و تحت تأثیر آنزیم‌های برش دهنده قرار گرفت.<p></p></span></h4><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><span>یافته‌ها: واکنش </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: AR-DZ" dir="ltr">PCR</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span><font face="B Yagut"><span style="mso-spacerun: yes">  </span>و سپس کلون قطعه‌ </font></span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: AR-DZ" dir="ltr">p4</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> در </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: AR-DZ" dir="ltr">T-Vector</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> به درستی انجام شد. پلاسمید حاوی قطعه استخراج وژن کلون شده در آن با آنزیم‌های برش دهنده، جدا شد و پلاسیمد بیان </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: AR-DZ" dir="ltr">PQE-30</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> با موفقیت ساب کلون شد و سپس توسط آنزیم‌های برش دهنده و انجام </span><font face="Times New Roman"><span style="mso-bidi-language: AR-DZ" dir="ltr">PCR</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> روی پلاسمید بیان، تأیید شد.<p></p></span></h4><h4 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" dir="rtl"><span>نتیجه‌‌گیری: این ترکیب ماده بیان، ژن </span><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">p4</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> در آزمایشگاه است. تولید آنتی ژن نو ترکیب </span><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">P4</span><span dir="rtl"></span></font><span style="FONT-FAMILY: " lang="AR-DZ"><span dir="rtl"></span> می‌تواند، به خصوص در زمینه تهیه واکنس، پاکار‌آید و علاوه بر آن در زمینه‌های هدف دارویی و تست‌های تشخیصی نیز قابل استفاده است.<p></p></span></h4></p></h2><p></p> <span style="mso-bidi-language: AR-DZ"><strong><font size="5"><font face="Monotype Corsiva"><p></p></font></font></strong></span><p></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><span><font face="Verdana"><strong></strong></font></span></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><span><font face="Verdana"><strong><font size="5" face="Monotype Corsiva">    </font>Background and Aim:</strong> Leishmania major p4 gene is normally expressed during amastigote form of the parasite and can be a good candidate for producing an effective vaccine. The aim of this study is to clone p4 gene in a suitable vector for further vaccine production studies .</font></span><p></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><b><span style="mso-bidi-language: AR-DZ">Materials and Methods:</span></b><span style="mso-bidi-language: AR-DZ"> This is an experimental study. Leishmania promastigote was grown in N.N.N. medium and later in the form of mass culture in RPMI 1640 cell culture medium. Total leishmania genomic DNA was extracted by centrifugation of promastigote and lysed by lysis buffer followed by boiling method. PCR was carried out using p4 gene specific primers. PCR product was detected by agaros gel electrophoresis and cloned into Bluescript plasmid via T/A cloning method. After transformation, the recombinant plasmid was screened<span style="mso-spacerun: yes">  </span>and digested by restriction enzyme </span></font><p></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><b><span style="mso-bidi-language: AR-DZ">Results:</span></b><span style="mso-bidi-language: AR-DZ"> PCR reaction and cloning p4 gene in T-vector was done successfully. Recombinant plasmid was extracted and cloned gene was released by restriction enzyme and subcloned into pPQE-30 expression vector and confirmed by restriction analysis and PCR. </span></font><p></p><p style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt" class="Style2"><font face="Verdana"><b><span style="mso-bidi-language: AR-DZ">Conclusion:</span></b><span style="mso-bidi-language: AR-DZ"> This newly expressed combination is p4 gene invitro. Production of p4 recombinant antigen is very much useful especially in the field of vaccine production, drug target and immunological studies.</span></font><p></p></p><p></p></p><p></p></p><p></p></p><p></p> ژن P4، کلونینگ، لیشمانیا ماژور، واکسن p4 gene,Cloning,Leishmania major,Vaccine 115 120 http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-312-14&slc_lang=fa&sid=1 M. Shaddel مینو شاددل 3900319475328460017702 3900319475328460017702 Yes H. Ormazdi هرمزد اورمزدی 3900319475328460017703 3900319475328460017703 No L. Akhlaghi لامع اخلاقی 3900319475328460017704 3900319475328460017704 No B. Kazemi بهرام کاظمی 3900319475328460017705 3900319475328460017705 No M. Bandepour مژگان بنده‌پور 3900319475328460017706 3900319475328460017706 No