Razi Journal of Medical Sciences
مجله علوم پزشکی رازی
RJMS
Medical Sciences
http://rjms.iums.ac.ir
39
journal39
2228-7043
2228-7051
en
jalali
1382
6
1
gregorian
2003
9
1
10
34
online
1
fulltext
fa
دستکاری ژنتیکی سویه آکرومونیومی تولید کننده سفالوسپورین C به منظور افزایش تولید این آنتیبیوتیک
GENETIC MANIPULATION OF CEPHALOSPORIN C-PRODUCING ACREMONIUM STRAIN FOR INCREASING ANTIBIOTIC TITER
علوم آزمایشگاهی
Laboratory Sciences
پژوهشي
Research
میزان تولید سفالوسپورین C(CPC) در سویههای تولید کننده این ماده در ارتباط با میزان ابراز یا مهار ژنهای تولید کننده آن است. هدف از این مطالعه تغییر ژنتیکی سویه تولید کننده سفالوسپورین C به منظور افزایش تولید این ماده بوده است. در این بررسی از سویه استاندارد تولید کننده آکرومونیوم کرایزوژنوم 2399DSM به عنوان سویه والد استفاده شد. عملیات موتاژنز روی محیطهای تولید بهینه سازی شده با بستر جامد صورت گرفت و موتاژنهای مورد استفاده، اشعه UV و NTG بودند که میزان بهینه آنها جهت موتاژنز به دست آمد. انتخاب موتانتها به صورت اتفاقی و نیز به صورت جهتدار (در حضور Hg++ و نیستاتین) صورت گرفت. میزان تولید موتانتها در محیطهای تولید با روشهای سنجش بیولوژیکی و HPLC بررسی شد و تولید نهایی CPC در موتانت نهایی برنامه موتاژنز با روش طیف سنجی جرمی تأیید گردید. بر اساس نتایج حاصل از این مطالعه میزان بهینه دوز موتاژن UV برابر 200 ثانیه و دوز تیمار NTG برابر با 7-5 دقیقه به دست آمد و میزان دوز مهاری Hg++ و نیستاتین روی سویه به ترتیب 006/0 و 3/0 گرم در دسیلیتر بود. با هر دو موتاژن و در هر دو روش انتخاب موتانتها، سویههای با تولید افزایش یافته CPC به دست آمدند اما اثرات UV و به کارگیری Hg++ در میزان موتاژنز و نیز در میزان افزایش تولید CPC بارزتر بود. در برترین سویه حاصل از این عملیات، تولید CPC به میزان 3/2 برابر افزایش یافت. حضور CPC در محیط تولید این سویه با نشان دادن یون مولکولی 415 در طیف جرمی آن تأیید شد. بطور کلی میتوان نتیجه گرفت که تغییر ساختار ژنتیکی سویه مولد CPC مقدور بوده و میتوان سویههای موتانت با تولید برتر را با عملیات موتاژنز به دست آورد.<br>
The extent of cephalosporin C(CPC) production in producing strains is related with the expression or inhibition of the relevent genes. The goal of this study was manipulate of the producing strain in order to increase its CPC production. Acremonium chrysogenum DSM 2399 is used as parent strain. Mutagenesis is performed on solid form of optimized production media. UV ray and NTG (with their optimum doses) were used as mutagens. Random and directed (in presence of Hg++ or nystatin) selections were applied. Biological (Bioassay) and HPLC assays were performed for CPC measurment. The identity of CPC is confirmed by mass spectrometery in final resulting best strain. The optimum mutagenic doses of UV and NTG were 200 sec. And 5-7 min respectively. Also the inhibitory doses of Hg++ and Nystatin were 0.006g/dl and 0.3g/dl respectively. Raised titer mutants were obtained with both mutagens and both selection methods, although UV mutagen and the presence of Hg++ were more effective. CPC titer were rised 2.3 fold in final resulting mutant. CPC identity in its production media were shown by observing, the unique 415 ion in mass spectrometery. By mutagenesis protocols, it is available to chang the CPC-biosynthetic genes in producing strains and increase CPC titer.
،1 – بهینهسازی سویه ،2 – آکرومونیوم ،3 – موتاژنز
Key Words: 1) Strain improvement 2) Acremonium 3) Mutagenesis
229
234
http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-181&slc_lang=fa&sid=1
M
Sarookhani
محمد
ساروخانی
3900319475328460014692
3900319475328460014692
Yes
N
Moazzami
نسرین
معظمی
3900319475328460014693
3900319475328460014693
No
M
Azarnoosh
مرتضی
آذرنوش
3900319475328460014694
3900319475328460014694
No